Аналог алоэ: Аналоги Алоэ экстракт жидкий — инструкции по применению заменителей Алоэ экстракт жидкий

Алоэ и красота: 8 лайфхаков

Сок алоэ — проверенное средство для ухода за кожей, Рассказываем, как по-разному можно его использовать. 

 

1.     Увлажнение кожи

Гель c алоэ прекрасно подходит в качестве увлажняющего средства для кожи лица и тела. После душа нанесите средство тонким слоем. Гель впитывается мгновенно, не оставляя ощущения липкости.

2.    Увлажняющие маски для лица

Нанесите гель с алоэ на лицо плотным слоем и оставьте на 15-30 минут. Этот способ прекрасно подойдет для реанимации сухой и обезвоженной кожи, особенно в зимний период.

3.    Лечение ожогов

Алоэ — незаменимое средство при солнечных ожогах! Оно успокаивает и охлаждает кожу, снимает боль и раздражение. Уже на следующий день ожог станет заметно меньше.

4.    Крем для и после бритья

Гель с алоэ — это прекрасный аналог кремам для бритья. Он увлажняет и успокаивает кожу не хуже, чем специальные лосьоны и бальзамы после бритья. Наносите в процессе и после.

5.    Увлажняющие маски для волос

Если у вас сухая кожа головы, гель с алоэ поможет вам с этим справиться. Нанесите необходимое количество геля на кожу головы и оставьте на 20-30 минут, а затем смойте. К маске можно добавить пару капель любого масла для усиления полезного эффекта.

6.    Уход за кожей век

Гель с алоэ можно использовать в виде патчей. Нанесите немного геля на ватные диски, приложите к области вокруг глаз и оставьте на 15-30 минут. Гель приятно охлаждает и успокаивает кожу, поможет справиться с отёками. 

7.     База под макияж

Если у вас не оказалось под рукой праймера, выровнять рельеф кожи можно с помощью геля с алоэ. Он станет прекрасной основой под макияж. 

8.    Крем для рук

С сухостью кожи рук сталкиваются многие, и это не зависит от сезона. Постоянное мытье рук и санитайзеры сушат кожу, а гель с алоэ прекрасно увлажняет и быстро впитывается, не оставляя липкости.

Бальзам для полости рта с аминокислотным комплексом, «Неовитином» и гелем алоэ-вера

Бальзам для полости рта с аминокислотным комплексом, «Неовитином» и гелем алоэ-вера

Благодаря комплексному действию пептидов тимуса (АК-1 Синтетический аналог тималина), пептидов сосудов (АК-7), «Неовитина»® и геля Алоэ-Вера обладает ярко выраженным противовоспалительным и противоотечным действием. Пептиды сосудов нормализуют обменные процессы и микроциркуляцию крови в тканях слизистой оболочки полости рта и пародонта. Пептиды тимуса стимулируют локальный иммунитет, оказывают антиоксидантное и антистрессорное действие, способствуют замедлению деструктивных процессов в тканях пародонта. Входящие в состав «Неовитина»® ферменты антиоксидантной защиты и тритерпеновые гликозиды оказывают быстрое противовоспалительное действие с долговременным эффектом. Алоэ-Вера (растение «первой помощи») блокирует действие гормона брадикинина, ответственного за развитие воспалительных процессов. Устраняет зуд и жжение, напряжение в десне, связанное с венозным застоем в микрососудах тканей пародонта. Удаляется зубной налет и неприятный запах изо рта.

Рекомендовано:

• При воспалительных заболеваниях пародонта (гингивит, пародонтит), хронически-рецидивирующих воспалительных заболеваниях слизистой оболочки полости рта (стоматит – афтозный, язвенный, некротический).
• В послеоперационном периоде при хирургических вмешательствах на тканях пародонта.
• Для предупреждения прогрессирующей деструкции тканей пародонта при пародонтите.

Способ применения:

Использовать в период после снятия обострения воспалительного процесса в полости рта ежедневно 2-3 раза в день в течение 2-х недель и/или для профилактики 1-2 раза в день. Полоскать не менее 30 секунд. Не споласкивать и не глотать.

Состав:

Вода очищенная, сорбитол, биоантиоксидантный комплекс «Неовитин»®, гель Алоэ-Вера, ПЭГ-40 касторовое масло, натриевая соль метилового эфира параоксибензойной кислоты, ароматизатор пищевой, лимонная кислота, аминокислотные комплексы АК-1 и АК-7,СI 42090, СI 19140.

Мыслящий тростник. Зачем растениям нужны нервные импульсы

«Чердак»: Я никогда не подумал бы, что кто-то занимается электрофизиологией растений, пока не наткнулся на ваши статьи.

Александр Волков: Вы не одиноки. Широкая публика привыкла воспринимать растения как еду или элементы ландшафта, даже не понимая, что они живые. Когда-то я делал в Хельсинки доклад по электрофизиологии растений, и тогда коллеги очень удивились: «Раньше занимался серьезной темой — несмешиваемыми жидкостями, а теперь какими-то фруктами, овощами». Но так было не всегда: первые книги по электрофизиологии растений были опубликованы еще в XVIII веке, и тогда изучение животных и растений шло почти параллельными путями. К примеру, Дарвин был уверен, что корень — это своеобразный мозг, химический компьютер, обрабатывающий сигналы со всего растения (см., например, «Способность к движению у растений» — прим. «Чердака»). А потом наступила Первая мировая война и все ресурсы были брошены на изучение электрофизиологии животных, потому что людям нужны были новые лекарства.

Ч: Это выглядит логичным: лабораторные мыши все-таки гораздо ближе к людям, чем фиалки.

А.В: В действительности различия между растениями и животными совсем не такие громадные, а в электрофизиологии они вообще минимальные. У растений есть почти полный аналог нейрона — проводящая ткань флоэма. У нее тот же самый состав, те же размеры и функции, что у нейронов. Единственное отличие, что у животных в нейронах для передачи потенциалов действия используются натриевый и калиевые ионные каналы, а в флоэме растений — хлоридный и калиевый. Вот и вся разница в нейрофизиологии. Немцы недавно нашли химические синапсы у растений, мы — электрические, и в целом у растений работают те же нейротрансмиттеры, что и у животных. Мне кажется, это даже логично: если бы я создавал мир, а я человек ленивый, я бы сделал все одинаковым, чтобы все было совместимо.

Дарвин считал корни растений своеобразным аналогом головного мозга. Фото: Ammak / Фотодом / Shutterstock

Зачем растениям нервные импульсы?

Мы не задумываемся об этом, но растения в своей жизни обрабатывают даже больше типов сигналов от внешней среды, чем люди или любые другие животные. Они реагируют на свет, тепло, гравитацию, солевой состав почвы, магнитное поле, различные патогены и гибко меняют свое поведение под действием полученной информации. К примеру, в лаборатории Стефано Манкузо (Stefano Mancuso) из Университета Флоренции проводили эксперименты с двумя вьющимися побегами фасоли. Ученые устанавливали между растениями общую опору, и побеги начинали наперегонки к ней тянуться. Но как только первое растение забиралось на опору, второе сразу будто признавало себя побежденным и переставало расти в этом направлении. Оно понимало, что борьба за ресурсы бессмысленна и лучше искать счастье где-нибудь в другом месте.

«Чердак»: Растения не двигаются, медленно растут и вообще живут неторопливо. Кажется, что нервные импульсы у них должны распространяться тоже гораздо медленнее.

Александр Волков: Это заблуждение, которое долго бытовало в науке. В 70-х годах XIX века англичане померили, что потенциал действия у венериной мухоловки распространяется со скоростью 20 сантиметров в секунду, но это была ошибка. Они были биологами и совершенно не владели техникой электроизмерений: в своих экспериментах англичане использовали медленные вольтметры, которые регистрировали нервные импульсы даже медленнее, чем они распространялись, что совершенно недопустимо. Теперь мы знаем, что нервные импульсы могут бежать по растениям с самыми разными скоростями в зависимости от места возбуждения сигнала и от его природы. Максимальная скорость распространения потенциалов действия у растений сравнима с такими же показателями у животных, а время релаксации после прохождения потенциала действия может меняться от миллисекунд до нескольких секунд.

Ч: Для чего растения используют эти нервные импульсы?

А.В: Хрестоматийный пример — это венерина мухоловка, о которой я уже упомянул. Эти растения живут в районах с очень влажной почвой, в которую плохо проникает воздух, и, соответственно, в этой почве мало азота. Недостаток этого необходимого вещества мухоловки добирают, поедая насекомых и маленьких лягушек, которых они ловят с помощью электрической ловушки — двух лепестков, в каждый из которых встроено по три пьезомеханических сенсора. Когда насекомое садится на любой из лепестков и задевает своей лапкой эти рецепторы, в них генерируется потенциал действия. Если насекомое задевает механосенсор дважды в течение 30 секунд, то ловушка захлопывается за доли секунды. Мы проверяли работу этой системы — прикладывали к ловушке венериной мухоловки искусственный электрический сигнал, и все работало точно так же — ловушка закрывалась. Потом мы повторили эти эксперименты с мимозой и другими растениями и так показали, что можно за счет электрических сигналов заставлять растения открываться, закрываться, двигаться, нагибаться — в общем, делать все что угодно. При этом внешние возбуждения разной природы генерируют у растений потенциалы действия, которые могут различаться амплитудой, скоростью и продолжительностью.

Ч: На что еще могут реагировать растения?

А.В: Если вы подстрижете травку у себя на даче, то в корни растений сразу пойдут потенциалы действия. По ним запустится экспрессия некоторых генов, и на порезах активируется синтез перекиси водорода, защищающей растения от инфекции. Точно так же если вы измените направление света, то первые 100 секунд растение никак не будет на это реагировать, для того чтобы отсечь вариант тени от птицы или животного, а потом снова пойдут электрические сигналы, по которым растение за секунды повернется таким образом, чтобы максимально захватить световой поток. Все то же самое будет, и когда вы станете капать кипящей водой, и когда поднесете горящую зажигалку, и когда опустите растение в лед — на любые раздражители растения реагируют с помощью электрических сигналов, которые управляют их ответами на изменившиеся условия внешней среды.

Венерина мухоловка ловит свою добычу с помощью нервных импульсов, возбуждаемых механосенсорами. Фото: Mark Freeth / Flickr

Память растений

Растения не только умеют реагировать на внешнюю среду и, по-видимому, просчитывать свои действия, но еще и завязывают между собой некоторые социальные отношения. Например, наблюдения немецкого лесничего Петера Воллебена показывают, что у деревьев бывает нечто вроде дружбы: деревья-партнеры переплетаются корнями и внимательно следят за тем, чтобы их кроны не мешали друг другу расти, в то время как случайные деревья, не питающие никаких особых чувств к своим соседям, всегда стараются захватить себе побольше жизненного пространства. При этом дружба может возникать и между деревьями разных видов. Так, в опытах того же Манкузо ученые наблюдали, как незадолго до смерти дугласия будто оставляет наследство: желтой сосне неподалеку от нее дерево посылало по корневой системе большое количество органических веществ.

«Чердак»: У растений есть память?

Александр Волков: У растений есть все те же виды памяти, что и у животных. Например, мы показали, что памятью обладает венерина мухоловка: чтобы ловушка сработала, на нее нужно отправить 10 микрокулонов электричества, но, оказывается, это не обязательно делать за один сеанс. Можно сначала подать два микрокулона, потом еще пять и так далее. Когда в сумме наберется 10, растению покажется, что в него попало насекомое, и оно захлопнется. Единственное, что между сеансами нельзя делать перерывы больше, чем в 40 секунд, иначе счетчик обнулится — получается такая краткосрочная память. А долгосрочную память растений увидеть еще проще: например, у нас одной весной на 30 апреля ударили заморозки, и буквально за одну ночь на инжирном дереве померзли все цветы, а в следующем году оно уже не расцветало до первого мая, потому что помнило, чем это закончилось. Похожих наблюдений физиологами растений было сделано немало за последние 50 лет.

Ч: Где хранится память растений?

А.В: Однажды я встретил на конференции на Канарских островах Леона Чуа, который в свое время предсказал существование мемристоров — сопротивлений с памятью о прошедшем токе. Мы разговорились: Чуа почти ничего не знал о ионных каналах и электрофизиологии растений, я — о мемристорах. В результате он попросил, чтобы я попробовал поискать мемристоры in vivo, потому что по его расчетам они должны быть сопряжены с памятью, но до сих пор в живых существах их никто не находил. У нас же все получилось: мы показали, что потенциал-зависимые калиевые каналы алоэ вера, мимозы и той же венериной мухоловки — это по природе своей мемристоры, а в следующих работах мемристивные свойства нашли в яблоках, картофеле, семенах тыквы, разных цветах. Вполне возможно, что память растений завязана именно на этих мемристорах, но точно пока это неизвестно.

Ч: Растения умеют принимать решения, обладают памятью. Следующий шаг — социальные взаимодействия. Могут ли растения общаться друг с другом?

А.В: Знаете, в «Аватаре» есть такой эпизод, где деревья общаются между собой под землей. Это не фантазия, как можно подумать, а установленный факт. Когда я жил в СССР, мы часто ходили за грибами и все знали, что гриб надо аккуратно срезать ножичком, чтобы не повредить грибницу. Теперь выясняется, что грибница — это электрический кабель, по которому деревья могут общаться как между собой, так и с грибами. Более того, есть множество свидетельств, что по грибнице деревья обмениваются не только электрическими сигналами, но еще и химическими соединениями или даже опасными вирусами и бактериями.

Ч: А что вы скажете по поводу мифа о том, что растения понимают человеческую речь, и поэтому с ними надо говорить ласково и спокойно, чтобы они лучше росли?

А.В: Это только миф, больше ничего.

Ч: Можем ли мы применять к растениям термины «боль», «мысли», «сознание»?

А. В: Об этом я ничего не знаю. Это уже вопросы философии. Прошлым летом в Петербурге был симпозиум по сигналам в растениях, и туда приехало сразу несколько философов из разных стран, так что этой темой сейчас начинают заниматься. Но я привык говорить о том, что я могу экспериментально проверить или рассчитать.

В семенах тыквы ученые нашли аналоги мемристоров — резисторов, обладающих памятью. Фото: Shawn Campbell / Flickr

Растения как сенсоры

Растения умеют координировать свои действия с помощью разветвленных сетей. Так, акация, произрастающая в африканской саванне, не только выделяет в свои листья токсическое вещество, когда ее начинают есть жирафы, но еще и испускает летучий «тревожный газ», передающий сигнал бедствия окружающим растениям. В результате жирафам в поисках пищи приходится перемещаться не к ближайшим деревьям, а отходить от них в среднем на 350 метров. Сегодня ученые мечтают использовать подобные отлаженные природой сети живых сенсоров для экологического мониторинга и других задач.

«Чердак»: Вы пробовали использовать ваши исследования по электрофизиологии растений на практике?

Александр Волков: У меня есть патенты по предсказанию и регистрации землетрясений с помощью растений. В преддверии землетрясений (в разных частях света временной интервал меняется от двух до семи суток) движение земной коры вызывает характерные электромагнитные поля. В свое время японцы предлагали их фиксировать с помощью гигантских антенн — железок высотой два километра, но никто такие антенны так и не смог построить, да это и не нужно. Растения настолько чувствительны к электромагнитным полям, что могут предсказывать землетрясения лучше любых антенн. Например, мы использовали для этих целей алоэ веру — подключали к ее листьями хлорсеребряные электроды, снимали электрическую активность, обрабатывали данные.

Ч: Звучит абсолютно фантастически. Почему эта система до сих пор не внедрена в практику?

А.В: Здесь возникла неожиданная проблема. Смотрите: допустим, вы мэр Сан-Франциско и узнаете, что через два дня будет землетрясение. Что вы будете делать? Если вы сообщите об этом людям, то в результате паники и давки может погибнуть или получить травмы даже больше людей, чем при землетрясении. Из-за таких ограничений я даже публично в открытой печати не могу обсуждать результаты наших работ. В любом случае, я думаю, рано или поздно у нас будут самые разные системы мониторинга, работающие на растениях-сенсорах. Например, мы в одной своей работе показали, что с помощью анализа электрофизиологических сигналов можно создать систему мгновенной диагностики различных заболеваний сельскохозяйственных растений.

Ученые предлагают предсказывать землетрясения по электрическим сигналам в листьях алоэ вера. Фото: rabiem22 / Flickr

 Михаил Петров

Заказать Сок Алоэ 50мл в интернет-аптеке

Ногинск, 1-ая Ильича ул, строение 6/29
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 221-53-85
В наличии, 95 ₽ Ногинск, Дмитрия Михайлова ул, 1
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-06-21
В наличии, 105 ₽ Химки, Ленинский пр, 1к1
пн-вс 8:00-21:00
+7 495 419 12 97
В наличии, 91 ₽

Видное, Лемешко ул, 10
пн-вс 9:00-21:00
+7 495 419-19-57

Видное, Строительная ул, д.

3, пом. 19-25
пн-вс 8:00-20:00
8 (495) 419-24-84

г. Домодедово аэропорт, 2 этаж
пн-вс круглосуточно
8-495-419-12-81

Голиково, Усковский пр-д, 2
пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-15-65

Жуковский, Клубная ул, 4/8

пн-вс 9:00-21:00
+7 495 221-53-88

Москва, Автозаводская ул., 13/1
пн-пт 08:00-23:00, сб-вс 09:00-22:00
+7 (495)419-24-50

Москва, Живописная ул, 12
пн-пт 8:00-22:00, сб 8:00-21:00, вс 9:00-21:00
+7 495 419-06-22

Москва, Нижняя Красносельская ул, д 35, с 49

пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 10:00-22:00
+7 495 419 13 48

Москва, Самора Машела ул, 2А
пн-пт 9:00-22:00, сб-вс 9:00-21:00
+7 495 419-12-51

Подольск, Академика Доллежаля ул, 3с2
пн-вс 9:00-21:00
+7 495-419-12-85

Щелково, Богородский мкр, 3

пн-вс 9:00-22:00
+7 495 419-12-54

Средства с алоэ | Lunifera

У многих из нас дома на подоконнике стоит это чудесное растение, еще с древних времен известное благодаря своему целебному воздействию на кожу. Уже несколько десятилетий сок алоэ применяется и в косметологии и медицине. Средства с алоэ есть и у многих корейских брендов, но об этом чуть позже.

Поговорим о непосредственной пользе самого растения:

Во-первых

, сок алоэ превосходно залечивает угри и следы от пост-акне. При регулярном применении как самого сока алоэ, так и косметических средств с ним, следы от прыщиков и раздражение кожи уменьшаются за считаные дни.

Во-вторых, алоэ превосходно успокаивает чувствительную кожу лица, одновременно очищая её и оказывая противовоспалительное действие.

В-третьих, сок алоэ благотворно влияет на кожу лица вне зависимости от ее типа. Сухую и нормальную кожу лица алоэ смягчает и увлажняет. Проблемную, склонную к жирности – очищает и дезодорирует.

Помимо этого, сок алоэ способствует сужению пор и заживлению ранок и гнойничков. Алоэ вера содержит огромное количество различных витаминов:

C, Е, А, В2, В6 и В12. Причем алоэ вера – один из немногих растений в мире вообще, которые содержат этот витамин (В12).

Так же в сок алоэ входят такие минералы, как кальций, натрий, калий и цинк.

Теперь можно рассказать и об одной чудесной серии средств, содержащих алоэ.

Одно из самых популярных средств, которое есть на нашем сайте – универсальный гель Aloe Aqua Soothing Gel от Skin79. В некоторых ситуациях этот гель просто незаменим. Например, при ожогах, полученных летом, при ощущении сухости или стянутости кожи… Гель не оставляет ощущения жирной пленки и липкости. Средство содержит целых 92% сока алоэ в составе.

Весьма интересен тот факт, что средство действительно универсально. Спектр применения геля невероятно широк: его можно использовать как увлажняющий крем, как средство от ожогов, даже как маску. Этот гель могут использовать и мужчины, как бальзам для кожи после бритья. Помимо этого, гель можно использовать как основу для макияжа – средство отлично впитывается. Так же средство можно использовать, как бальзам после укуса насекомых, снимающий зуд и покраснения кожи. Подойдет средство и в качестве

крема для рук, и даже как бальзам для волос! Сам по себе гель очень экономичен и одной баночки хватает на несколько месяцев. Гель рекомендуется хранить в холодильнике.

Аналог этого геля есть у Mizon и у Tony Moly. Средства сами по себе очень похожи, небольшая разница в составе в процентном соотношении сока алоэ вера и экстрактах растений.

Подводя итог, можно сказать, что средства с алоэ рекомендованы для регулярного применения для любого типа кожи. Они очень универсальны! Даже больше – в некоторых ситуациях, средства с алоэ просто незаменимы. Отправляясь в отпуск в жаркие страны, вместо средства от ожогов, бальзама от укусов насекомых, увлажняющего крема и маски для лица, можно взять одно – с целебным соком алоэ вера 😉

Всем отличного дня,

Ваша Luni

ПОДОБРАТЬ СРЕДСТВО С АЛОЕ

© 2014 Lunifera. ru. Статья написана Дарьей Бойко, специально для Lunifera.ru. Любое копирование без согласия администрации магазина запрещено.

Аналоги (замены) Спрей назальный «Квикс Алоэ» 30мл

1		Средства для промывания	90	335…477
2		Средства для промывания	143	478. ..612
3		Средства для промывания	79	349…516
4		Средства для промывания	86	489. ..599
5		Средства для промывания	102	282…536
6		Средства для промывания	207	137. ..280
7		Средства для промывания	99	151…324
8		Аквалор беби спрей 125мл Средства для промывания	—
9		Средства для промывания	205	337. ..471
10		Средства для промывания	33	299…453
11		Средства для промывания	225	340. ..510
12		Средства для промывания	88	381…679
13		Средства для промывания	18	419. ..476
14		Средства для промывания	192	296…424
15		Средства для промывания	159	272. ..419
16		Аквалор софт спрей 125мл Средства для промывания	—
17		Средства для промывания	209	347. ..485
18		Средства для промывания	90	297…578
19		Аквалор форте спрей 125мл Средства для промывания	—
20		Средства для промывания	194	389. ..504
21		Средства для промывания	175	401…741
22		Средства для промывания	111	449. ..686
23		АкваМастер Эвалар морская соль 0,6г Средства для промывания	—
24		АкваМастер Эвалар устройство 50мл Средства для промывания	—
25		Амонтис Спелунка раствор для ингаляции 5мл Средства для промывания	—
26		Аспектон спрей назальный 30мл Средства для промывания	—
27		Африн Чистое Море Детский, дозированный спрей 20мл Средства для промывания	—
28		Африн Чистое Море Средство для очищения носа спрей 75мл Средства для промывания	—
29		Африн Чистое Море Средство от заложенности носа спрей 75мл Средства для промывания	—
30		Вибролор спрей 20мл Средства для промывания	—
31		ГелоСитин спрей назальный 15мл Средства для промывания	—
32		Средства для промывания	251	313. ..447
33		Средства для промывания	179	234…380
34		Средства для промывания	219	144. ..266
35		Средства для промывания	240	305…468
36		Средства для промывания	217	216. ..363
37		Средства для промывания	253	304…520
38		Средства для промывания	195	273. ..469
39		Средства для промывания	237	327…468
40		Средства для промывания	172	209. ..366
41		Средства для промывания	231	339…536
42		ЛинАква Форте для горла аэрозоль 50мл Средства для промывания	—
43		Средства для промывания	234	231. ..363
44		Средства для промывания	20	273…420
45		Средства для промывания	13	236. ..336
46		Мерсонар спрей с морской водой изотонический 100мл Средства для промывания	—
47		Мерсонар спрей с морской водой Плюс гипертонический 100мл Средства для промывания	—
48		Морская вода «АкваСол» раствор 50мл Средства для промывания	—
49		Средства для промывания	4	245. ..246
50		Морская вода и алоэ «АкваСол» раствор 50мл Средства для промывания	—
51		Средства для промывания	4	245. ..249
52		Морская вода и пантенол «АкваСол» раствор 50мл Средства для промывания	—
53		Средства для промывания	167	289. ..440
54		Пиносол Аква спрей назальный 100мл Средства для промывания	—
55		Средства для промывания	1	384
56		Средства для промывания	17	299. ..507
57		Средства для промывания	34	309…526
58		Средства для промывания	24	359. ..496
59		Риностоп Аква Софт средство для орошения и промывания полости носа для детей и взрослых 50мл Средства для промывания	—
60		Средства для промывания	34	325. ..382
61		Средства для промывания	2	165…167
62		Санорин Аква Морская вода гипертоническая спрей назальный 120мл Средства для промывания	—
63		Санорин Аква Морская вода гипертоническая спрей назальный 30мл Средства для промывания	—
64		Санорин Аква Морская вода изотоническая спрей назальный 120мл Средства для промывания	—
65		Санорин Аква Натура Прополис Тимьян спрей назальный 20мл Средства для промывания	—
66		Санорин Аква Натура Прополис Тимьян Эвкалипт спрей назальный 20мл Средства для промывания	—
67		Средства для промывания	178	330. ..463
68		Средства для промывания	15	380…429
69		Средства для промывания	174	276. ..520
70		Средства для промывания	37	314…451
71		Средство «FlyBee» спрей для носа 50мл Средства для промывания	—
72		Средства для промывания	21	363. ..698
73		Средства для промывания	191	328…624
74		Средства для промывания	84	262. ..459
75		Средства для промывания	5	376…442
76		Средства для промывания	177	419. ..466

L’EUDINE Гель алоэ вера

Продукты L’EUDINE для красоты и здоровья произведены в США , с высококачественными рецептурами и натуральными продуктами от их происхождения.

ПРЕИМУЩЕСТВА

• Борется с инфекциями.
• Снимает раздражение.
• Отпугивает насекомых.
• Освежает и восстанавливает кожу.
• Идеально подходит для детей и взрослых.
• Способствует заживлению ожогов, не оставляя следов и шрамов.
• Ухаживает за кожей, облегчая самые разные состояния и проблемы.

ОСНОВНОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
Предназначено для предотвращения и облегчения симптомов, вызванных воздействием солнца, огнем, истиранием, химическими веществами, волдырями, шрамами, экземой, псориазом, дерматитом, зудом, растяжками, порезами и укусами насекомых. Может использоваться как средство от насекомых. Снимает легкую боль благодаря своим успокаивающим свойствам.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Нанесите большое количество геля алоэ вера и массируйте круговыми движениями нужную область 2–3 раза в день или по мере необходимости.

BENEFICIOS

• Cuida la piel aliviando una gran variedad de afecciones y problemas.
• Promueve la cura de quemaduras sin dejar marcas ni cicatrices.
• Calma iraciones.
• Refresca y restaurant.
• Ayuda отпугиватель насекомых.
• Борьба с инфекциями.
• Perfecto для использования в любых других целях.

ПРИНЦИПЫ USOS
Recomendado para quemaduras producidas por fuego, roce, qumicos y sol.Амполлы, рубцы, экземы, псориаз, дерматиты, кожный зуд. Пикадурас-де-инсектоз, репелент-де-инсектоз. Dolores leves, por sus caractersticas calmantes.

MODO DE USO
Aplicar una cantidad generosa de Aloe Vera Gel realizando masajes circares en la zona deseada de 2 a 3 veces al da o segn sea necesario.

L’EUDINE Код продукта:
illusionsusa.us/product-lines/natural/aloe-vera-gel/
site.leudine.org/productos/linea-bioterapia/aloe-vera-gel/

L ‘EUDINE ALOE VERA GEL
(GEL CORPORAL ALOE VERA)

Содержание: 8 эт.унция. (237 мл)

Цена:

QTY1 × 15.95 = 15.95
QTY2 × 15.50 = 31.00

Используйте раскрывающееся меню QTY1 + x …, чтобы получить

Телефонная информация кампуса

— Университет Балтимора

Основное содержание Управление технологических услуг обеспечивает высококачественную передачу голоса и данных через телефонные службы, разработанные для кампуса UB.На этой странице представлена ​​информация о стоимости телефона, изменении функций, использовании телефона и голосовой почты. Если вам нужна помощь, обратитесь в информационный центр OTS.

Модели телефонов

IP-телефоны

являются стандартными офисными телефонами в UB. Их соединение идет через Интернет, используя сетевой разъем UB. Он может использовать разъем для подключения к сети вашего компьютера.

Доступны две модели:

• Nortel IP Phone 1120E: стандартная модель
• Nortel IP Phone 1140E: предоставляет больше функций и линий, чем 1120E

Щелкните здесь, чтобы сравнить две модели.

Использование аналоговых телефонов разрешено только в особых случаях. Аналоговые линии используются только для факсимильных аппаратов, старых моделей конференц-телефонов Polycom, внутренних линий и телефонов экстренных служб.

Громкоговорители Polycom используются для конференц-связи. Наборы IP Polycom — это стандартные конференц-телефоны в кампусе, обеспечивающие лучшую четкость голоса, чем аналоговые. Вы можете приобрести IP-телефон Polycom или зарезервировать его для одноразового использования через информационный центр OTS.При необходимости вы можете использовать Nortel 1100 series в качестве устройства громкой связи для конференц-связи до 3 участников.

Голосовой набор

Наберите x5900 с телефона в университетском городке (или 410.837.5900 с телефона за пределами кампуса) и произнесите имя и фамилию человека, которому вы хотите позвонить. Если вы не знаете имя человека, вы можете произнести название отдела, например «Отдел кадров».

Обратите внимание, что названия некоторых офисов поначалу могут быть непростыми.Свяжитесь с колл-центром OTS (410.837.6262 или [email protected]), чтобы сообщить о любых несоответствиях в новой системе.

Система попытается подтвердить имя предполагаемой стороны, повторяя имя.

• Если имя правильное, скажите «Подключиться» или дождитесь подключения.
• Если имя неверно, скажите «Вернуться», и система снова попытается определить имя.
• Если вы хотите услышать номер без подключения сразу после этого, произнесите «Номер.”
• Если вы хотите услышать номер, а затем подключиться, скажите «Оба».

Если система не может распознать имя, вы будете переведены к оператору.

Ярлыки голосового набора

• Подключиться: подключиться к вашей вечеринке
• Вернуться: вернуться в систему / повторить попытку
• Номер: прослушивание номера без подключения
• Оба: сначала прослушайте номер, а затем подключитесь к абоненту

Телефон и линия

Для установки нового телефона может потребоваться новый кабель, разъем, лицензия и оборудование, в зависимости от того, что было установлено ранее. Щелкните здесь, если вам нужна информация о перемещении телефона в место с существующим подключением, как в случае смены офиса.

Рекомендуем вам связываться с OTS задолго до переезда или строительства офиса, чтобы ваши телефоны и компьютеры были подключены к сети как можно скорее после переезда.

В приведенной ниже таблице цен представлен подробный список расходов на активацию, кабели и телефонные аппараты. Окончательная стоимость новой установки будет зависеть от места и типа активации.Вы можете запросить смету перед заказом работы. Прежде чем позвонить или отправить запрос по электронной почте, вы должны подумать над этими вопросами:

• Вам нужен телефон или у вас уже есть телефон для этого места?
• Будет ли новый телефон аналоговым или IP-телефоном?
• Есть ли доступный домкрат в этой области?
• Есть ли разъем рядом с тем местом, где будет находиться телефон, или вам понадобится более длинный кабель или новый разъем?
• Линия активна?

Стоимость

Сервис	Стоимость
Активация услуги
Лицензия на IP-телефон	325 долларов. 00
IP-телефон: активация линейного и сетевого разъема	475,00 $
Активация аналоговой линии для работы с факсом	305 долларов США.00
Активация аналоговой линии (не факс)	195,00
Активация сетевого разъема	150 долларов США. 00
Кабельная проводка
Прокладка кабеля (Duplex Wire Pull)	510 долларов.00
Монтаж кабеля (Quad Wire Pull)	880,00 $
Телефонные аппараты
IP-телефон Nortel 1120E *	240 долларов. 00
IP-телефон Nortel 1140E *	350,00
Модуль расширения Nortel IP для IP-телефона *	100.00
IP Polycom	875,00 $
Аналоговый настенный телефон	60 долларов. 00

* На IP-телефоны Nortel предоставляется годовая гарантия.

** IP-телефоны службы поддержки требуют отдельной покупки наушников. Наушники можно приобрести напрямую у сертифицированного поставщика, например у Plantronics.

[верх страницы]

Перемещение телефона

Перенести телефон из одного офиса или здания в другой с активным разъемом, как правило, несложно.Если разъем в вашем новом месте был активирован для телефонной линии, этот разъем будет доступен для использования без дополнительной оплаты. Расходы могут быть покрыты в следующих случаях:

• Новый офис не оборудован надлежащей кабельной разводкой. Установка сетевых разъемов выполняется подрядчиком по контракту. Ваша организация несет ответственность за этот сбор.
• Хотя OTS рекомендует брать ваш телефон с собой при переезде, организация, которая изначально владела телефоном и лицензией, может взимать плату за замену, если вы переезжаете в новый отдел.

OTS может помочь вам определить, что вам понадобится для переезда. Свяжитесь с информационным центром OTS по крайней мере за семь дней до переезда, чтобы обновить свое местоположение.

Замена телефона

• Неисправный телефонный аппарат может быть заменен отремонтированным без дополнительных затрат для пользователя в соответствии с новым контрактом на телефонную систему (повреждение телефонов в результате несчастных случаев не покрывается).
• Комиссия за приобретение новых телефонных аппаратов. Стоимость наборов зависит от модели. Пожалуйста, свяжитесь с OTS для получения подробной информации.

Ежемесячные телефонные счета и платежи

Организациям выставляются счета за исходящие звонки по тарифам, указанным ниже. Verizon ежемесячно выставляет счет университету. Счета Verizon обрабатываются OTS, которая определяет, какие расходы понесло каждое подразделение.Эти проанализированные счета затем распространяются среди организаций.

• Расчетные циклы выполняются с первого числа месяца до последнего числа месяца.
• Департаменты отправляют свои счета ежеквартально.
• Ежемесячный счет за телефон не включает плату за обслуживание и активацию линии. Эти платежи обрабатываются с помощью отдельной межведомственной формы выставления счетов.

Звонков на	Стоимость звонка
Местные звонки (Балтимор и окрестности)	0 руб. 14 за звонок
Все остальные звонки в Мэриленде	0,0688 $ за минуту
Междугородние звонки внутри США	0 руб.0760 за мин
Международные звонки	Зависит от страны
411 звонков	$ 2. 99 за звонок

Цены могут быть изменены на основании контракта с поставщиком.

[верх страницы]

Мобильные устройства

Мобильные устройства и телефоны можно настроить для подключения к электронной почте UB. Щелкните здесь, чтобы узнать подробности.
Примечание. Служба Blackberry Enterprise Service (BES) больше не доступна.

[верх страницы]

Аксессуары

Дополнительное оборудование, такое как наушники или более длинные шнуры для трубки, можно приобрести непосредственно у поставщиков. Plantronics предлагает широкий выбор аксессуаров для телефонов.

[верх страницы]

Оценка эффекта геля алоэ вера по сравнению с ланолиновым маслом при лечении трещин стопы: клиническое испытание

---

Саиди М. , Зарей Ф., Насери Салахшур В., Зарей Ф., Джавахери Тегерани Ф.Оценка эффекта геля алоэ вера по сравнению с ланолиновым маслом при лечении трещин стопы: клиническое испытание. J. Med. Растения. 2019; 18 (69): 153-163
URL: http://jmp.ir/article-1-2370-en.html Оценка действия геля алоэ вера по сравнению с ланолиновым маслом при лечении трещин стопы: клиническое испытание

1- Преподаватель, Школа медсестер и акушерства, Университет медицинских наук Савех, Савех, Иран
2- Преподаватель, Школа медсестер и акушерства, Отделение медицинских наук Исламского университета Азад, Тегеран, Иран
3- Студент медсестер, магистр медицины, Школа медсестер и акушерства, Университет медицинских наук Арак, Арак, Иран
4- аспирант школы медсестер, медсестер и акушерок, Иранский университет медицинских наук, Тегеран, Иран

Аннотация: (1886 просмотров)

Справочная информация: Трещина стопы — одно из самых распространенных заболеваний стопы.
Цель: Это исследование было проведено для оценки влияния геля алоэ вера и ланолинового масла на процесс заживления трещин стопы в городе Савех.
Методы: В этом интервенционном исследовании, которое проводилось на 94 пациентах с трещинами стопы на обеих стопах, использовались демографический информационный опросник, шкала клинической оценки сухости стоп и визуально-аналоговая шкала (ВАШ). Субъекты в первой группе вмешательства использовали гель алоэ вера, в то время как вторая группа вмешательства использовала ланолин.Образцы контрольной группы получали плацебо, соответствующее оригинальному лекарству. Наконец, данные были проанализированы с использованием статистического программного обеспечения SPSS, Ver. 23.
Результаты: Анализ данных («39») не показал существенных различий между тремя группами до вмешательства в отношении сухости ног. Но через две недели после вмешательства средние показатели сухости ног в группе вмешательства I (алоэ вера) были получены значительно ниже, чем в группе вмешательства II (ланолин) (P = 0.027). Кроме того, баллы по визуальной аналоговой шкале сухости стоп не показали значимых различий в трех группах до вмешательства, тогда как после вмешательства средний балл визуального аналога в группе вмешательства I был значительно (P = 0,007) ниже, чем в группе вмешательства. вмешательство II группы.
Заключение: Результаты этого исследования показывают более благоприятный эффект алоэ вера по сравнению с ланолином в лечении сухости и растрескивания стоп.
Полный текст [PDF 459 кб] (694 Загрузки) Тип обучения: Исследование | Предмет: Фармакология и токсикология
Поступила: 24.11.2018 | Принято: 24.11.2018 | Опубликовано: 2018/11/24

---

Последовательный

Питер Дайер — клавишник, музыкальный руководитель, звукорежиссер и продюсер, гастролировавший и записывавшийся с Алоэ Блакком, Адамом Ламбертом, St.Винсент, Мэрайя Кэри, Ван Хант, Кристал Льюис, Кэм и многие другие. Среди других заслуг при записи — альбом Avicii «True» и всемирный хит «Wake Me Up», Фло Рида, Нил Роджерс, Vancouver Sleep Clinic, а также туры с AlunaGeorge и Quadron. Преданный пользователь и фанат DSI, Питер предоставил заводские настройки для Prophet 12, Pro 2, Prophet-6, OB-6 и Tempest.

Совсем недавно он занимался программированием осенних туров Мигеля, Хейли Киёко, Тегана и Сары, а также звуковым оформлением для предстоящего короткометражного боевика BMW «Побег.Группа Питера, Rafferty , , размещалась в рекламе Apple и CW’s Supergirl . Питер также является участником синти-поп группы Monogem. Вы можете услышать «Пророка 12» Петра в песнях Моногема «Take It Slow» и «Gone», ссылки на которые приведены ниже.

Мы поговорили с Петром о том, как он использует Пророка 12.

Петр, что заставило вас выбрать Пророка 12?

«Мне посчастливилось участвовать в нескольких проектах DSI, начиная с Mopho x4, но мое ученичество абсолютно искреннее! Вы, ребята, делаете вещи, которые не только великолепно звучат, но и стабильно работают, что для меня важно.Другие доступные виртуальные аналоговые платы сводили меня с ума из-за плохих генераторов, которые приходилось пропитывать эффектами, чтобы терпеть. По сути, мне нужен аналоговый звук и пользовательский интерфейс с современными цифровыми удобствами.

Я надеялся на синтезатор, который мог бы преуспеть в широком спектре постановок и туров, особенно в коммерческой поп-музыке и EDM, но со скоростью аналогового интерфейса управления, к которому я привык. Когда вы гастролируете на клавишных инструментах, важны разные вещи, а не когда вы используете синтезатор в контролируемой студийной среде.Я могу набрать что-то на синтезаторе DSI в тысячу раз быстрее, чем копаться на рабочей станции. В условиях репетиции с большим бюджетом нет терпения к общим проблемам и ограничениям аналогового синтезатора.

Другие вещи, которые мне нравятся в Prophet 12, — это подсчет голосов, о котором мне не нужно беспокоиться о потолке, его огромная матрица модов, подобная софтсинту, его разделения и стеки, фильтр высоких частот, дополнительные сенсорные контроллеры для мгновенного переключения. изменения, а также задержки и эффекты характера.Мне даже нравятся такие скучные вещи, как управление предустановками и спецификации MIDI, прочное шасси и различные диапазоны регулировки колеса модуляции. Безусловно, это моя любимая доска. У меня есть клавиатура Prophet 12 (серийный номер 002) и модуль P12 ».

Как ты им пользуешься?

«P12 ходил со мной практически на каждой сессии с тех пор, как я его приобрел, из-за его тональной гибкости. Это также первая доска, к которой я обращаюсь дома. Благодаря широте охвата звукового дизайна он подходит для самых разных жанров.Например, я гастролировал с ним в качестве верхней доски для Aloe Blacc, так как он может охватывать его старый соул-каталог Билла Уизера, а также поп-музыку Aloe, такую ​​как «Wake Me Up» и «The Man». Я записывал с St. Vincent ранее этим летом, и Prophet 12 поместился в это пространство между Prophet-6 и басовым ядром Moog, которое у нас было, обеспечивая пышную ширину и мерцание. Это создало идеальную кровать. Я запрограммировал несколько забавных Vox, Farfisa и струнных машин для шоу Aloe, которые на Prophet 12 имеют преимущество в виде регулировки тембра фильтра и огибающих по сравнению с эмуляцией стандартной рабочей станции Farfisa.Мой модуль Prophet 12 обычно идет со мной в дорогу. Я использую его, чтобы иметь знакомый аппаратный синтезатор для записи на ходу. Я сброшу на него нашивки для клавиатуры Prophet 12 и брошу в рюкзак на свидания. Я сделал пару сэмплов Prophet 12, которые свалил в сэмплер Nord Stage 2, чтобы положить их под фортепиано ».

Что вам больше всего в нем нравится?

«Мне нравится, что осцилляторы Prophet 12 созданы для того, чтобы их можно было перекосить и испортить. Поскольку я вырос на Juno-60, у меня есть крайняя слабость к широтно-импульсной модуляции, поэтому концептуально тот факт, что вы можете делать это независимо со всеми четырьмя генераторами с их собственными LFO, — это своего рода смехотворная гибкость, от которой я упал в обморок. аппаратный синтезатор.Мне также нравятся ленты для точных живых изменений, так как я могу влиять на несколько параметров (используя матрицу модов) и дотянуться до мизинца, все еще удерживая аккорд — затем вы отпускаете и снова переходите в припев с вашим базовым патчем, так как вы не поиграл с позициями регуляторов ».

Что это дает вам такого, чего нет у других синтезаторов?

«Пророк 12 сочетает лучшее от аналогового и цифрового. И то, и другое работает очень хорошо. Один универсальный синтезатор — вот что делает его моим любимым.Горячие аналоговые пэды и провода в пиках или резкие волновые переходные процессы, волновой сброс и цифровое сияние, когда мне это нужно, — что, несмотря на то, что аналоговые пуристы набрасываются на это, хорошо во многих моих ситуациях. Скорость и вдохновение ручного интерфейса с отличным источником звука того стоят. Это вторая натура. Для сравнения: редактирование с перетаскиванием — отстой. Убивает вдохновение и терпение других людей. Кроме того, аналоговое стерео искажение … давай! Когда я играю, продюсер подошел к этой ручке и дьявольски улыбаюсь, когда они ее повернут.Чтобы никто не подумал, что это просто уловка, это звучит чертовски хорошо ».

Есть ли какие-нибудь интересные приемы или приемы Prophet 12, которыми вы хотели бы поделиться?

«Так много! Мне нужен блог. Вот несколько:

Трюки с эквалайзером

Подходит для: Используйте фильтр верхних частот без резонанса и срезайте до 35 и выше. Типичный FOH-исполнитель в любом случае собирается использовать высокочастотные клавиши в PA, но выполнение этого перед их цепочкой приведет к более чистому миксу и более осознанным решениям с вашей стороны.

Или нет: Если вы хотите ощутимый удар в области низких средних частот, установите диапазон высоких частот на 22–28 и резонанс на 80–90.

Трюк с колесом шага

Gone Girl bendys: Установите 4 генератора на пилообразную форму, каждый с различными уровнями точной настройки (например: +2, -2, +8, -8). Установите Osc 3 на C3, а остальные на C2. Установите фильтр нижних частот на 4-полюсный на 85, резонанс 26, без огибающей. Ударьте искажение и доведите оба до максимума. Включите Unison, установите 12 голосов и настройте на 8.Установите диапазон колеса высоты тона на одну октаву вверх и на 2 октавы вниз. В матрице мод назначьте питчбенд на 3 слота. Pitchbend до Osc 2 Freq, величина 5. Pitchbend до Osc3 Freq, величина 13, и Pitchbend до значения среза LPF 83. Теперь удерживайте ноту и рип на колесе высоты тона. Поднимаясь вверх, он будет кричать о кровавом убийстве, а при спуске он отфильтрует и убьет беднягу НПХ.

Уловки с задержкой

Педаль хоруса: Превратите одну из линий задержки в аналог педали хоруса.Установите задержку, равную 100, ее время задержки на 34 и понизьте служебный фильтр нижних частот на задержке до 85. Используйте нулевую обратную связь. Теперь назначьте свободный LFO для времени задержки с треугольной волной на медленной частоте, такой как 6, и установите количество LFO на 1-6, очень маленькое. Если вам нужно меньше «микширования» припева, уменьшите количество. Настройте по вкусу.

Фленджер: Та же концепция, что и припев. Величина задержки — 127, обратная связь — 96, время задержки — 20, а служебный фильтр нижних частот задержки — 85.Затем отрегулируйте время задержки с помощью свободно вращающегося треугольника LFO с частотой 44 и величиной 2. Если вы хотите изменить скорость вашего флэнджера, измените скорость LFO. Если он слишком резонансный, уменьшите обратную связь задержки.

Весенний глагол: Проще говоря, реверберация — это сеть из множества различных задержек. Для начала установите 4 задержки с 4 разными значениями времени — 76, 86, 91, 96. Установите все 4 задержки на 34, а все 4 задержки обратной связи на 80. Установите все 4 фильтра нижних частот задержки на 45.Настройте панораму каждой задержки по-разному. Например: 80, 45, 88, 50. Это хорошее место для начала квадратной пружины гитарного усилителя. Возьмите разные миксы, фильтры нижних частот и количество обратной связи для каждого. Или установите LFO для модуляции панорамирования всех 4 задержек на их другие стороны соответственно, используя матрицу модуляции.

Струнная машина: Наши любимые струнные машины — это типы с одним генератором и ансамблевой схемой, состоящей из нескольких ответвлений задержки. Запустите базовый патч, используя только Osc 1, установленный на пилу, с открытым фильтром и LFO 1, установленным на Osc 1 Freq.Установите частоту LFO 1 на 152, величину 3 и скорость нарастания 40. Установите для всех 4 задержек нулевую обратную связь, величину 127, а низкочастотный фильтр каждой задержки — 115. Установите время каждой задержки на 17, 19, 21 и 23 соответственно. . Установите в качестве назначения LFO 2 значение Delay Time 1, частоту 80, количество 2. Установите LFO 3 на Delay Time 2, частоту 90, количество 2. В слоте матрицы мод установите LFO 2, чтобы также отправлять на Delay Time 3 с количеством -2, и LFO 3 для отправки в Delay Time 4 с суммой -2. Это всего лишь один осциллятор! »

Отслеживаете обновления компании Peter по тел .:

петердьер.нетто

soundcloud.com/peterkeys88

www.instagram.com/peterkeys88/

Слушайте музыку Питера здесь:

«Take It Slow» от Monogem на сайте spotify

Monogem’s «Gone» на Spotify

Коротко о BMW Films: The Escape

Supergirl Season 2 трейлер:

Кристалл Льюис и Питер Дайер «Пожалуйста, не уходи», живое джемо

---

ПОДРОБНЕЕ О ПРОРОКЕ 12

Для получения дополнительной информации посетите страницу продукта Prophet 12 здесь.

Найдите местного дилера, чтобы узнать цены на Prophet 12 здесь.

Если вы используете Prophet 12 интересным образом, расскажите нам об этом. Свяжитесь с нами по адресу [email protected].

проспективное двойное слепое клиническое исследование

Eur Rev Med Pharmacol Sci 2014; 18 (7): 1078-1084

Н. Рахмани, М. Хадемло, К. Восуги, С. Ассадпур

Отделение хирургии медицинского факультета Мазандаранского университета медицинских наук, Сари, Иран[email protected]

---

Алоэ вера — лекарственное растение, которое способствует заживлению ран при ожоговых травмах. Было проведено проспективное клиническое испытание для оценки эффектов крема для местного применения, содержащего 0,5% порошка сока алоэ вера, при лечении хронических трещин заднего прохода. Крем с алоэ пациенты наносили на рану 3 раза в день в течение 6 недель, следуя указаниям врача. Боль оценивалась с помощью визуальной аналоговой шкалы до лечения и в конце каждой недели лечения.Заживление ран, а также количество и тяжесть кровотечения исследовали и оценивали до и в конце каждой недели лечения. Также наблюдались статистически значимые различия в хронической боли в анальной трещине, кровотечении при дефекте и заживлении ран до и в конце первой недели лечения по сравнению с контрольной группой (p <0,0001). В этом исследовании крем для местного применения, содержащий сок алоэ вера, был эффективным средством лечения хронических трещин заднего прохода. Это многообещающий результат, указывающий на то, что дальнейшие сравнительные исследования оправданы.

Бесплатная загрузка PDF

цитировать эту статью

Н. Рахмани, М. Хадемло, К. Восуги, С. Ассадпур
Влияние крема с алоэ вера на хроническую боль при трещинах заднего прохода, заживление ран и кровотечение при побеге: проспективное двойное слепое клиническое испытание

Eur Rev Med Pharmacol Sci
Год: 2014
Vol.18 — N. 7
Страницы: 1078-1084

Алоэ вера индуцированная биомиметическая сборка нуклеооснований в наноразмерные частицы

Образец цитирования: Чаухан А., Зубаир С., Шервани А., Овейс М. (2012) Алоэ вера индуцированная биомиметическая сборка наноразмерных нуклеобаз в наноразмерные нуклеоосновы. PLoS ONE 7 (3): e32049. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049

Редактор: Мени Вануну, Северо-Восточный университет, Соединенные Штаты Америки

Поступило: 30 сентября 2011 г .; Одобрена: 20 января 2012 г .; Опубликовано: 5 марта 2012 г.

Авторские права: © 2012 Chauhan et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Финансирование было предоставлено Департаментом биотехнологии правительства Индии, Нью-Дели. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Наноразмерные частицы приобретают необычные, но полезные свойства, которые могут найти промышленное применение в биотехнологии, а также в других областях с одинаковой вероятностью [1], [2]. Конкретный размер наночастиц считается очень важным для их применения в качестве маркера клеток при био-зондировании, био-визуализации и целевой доставке лекарств и т. Д. [1] — [4]. При использовании в качестве средства доставки наноразмерный диапазон частиц, имеющих терапевтическое значение, не только делает их пригодными для разработки системных, пероральных, легочных, трансдермальных и других путей доставки, но также помогает в увеличении биодоступности, защите биологической активности, стабильность и, в конечном итоге, в адресной доставке интересующего лекарственного средства.Фактически, наноструктурированные частицы лекарства обладают способностью проникать в клетки и соединительные ткани и, таким образом, могут быть эффективно нацелены на желаемый биологический участок, не забивая капилляры. Понятно, что размер композиции регулирует ее поглощение клетками, что в конечном итоге приводит к большему накоплению связанного лекарственного средства в желаемом месте. После интернализации лекарственная форма может удерживаться больными / инфицированными тканями в течение более длительного времени, тем самым повышая биодоступность и, в конечном итоге, эффективность лекарственного средства [5].

Биомиметический синтез наночастиц довольно распространен как в одноклеточных, так и в многоклеточных организмах. В многоклеточных организмах синтез твердых тканей, таких как раковины, спикулы, зубы и кости и т. Д. , происходит в рамках скоординированного процесса, например, образование кости опосредуется остеобластами, в то время как дентинобласты отвечают за образование дентина [6] , [7]. В большинстве таких естественных структур частицы состоят из очень сложной и упорядоченной архитектуры с четко определенными формами.Интересно, что синтезированные частицы формируются в определенном диапазоне размеров, ориентации и геометрической симметрии. Таким образом, образуются различные структуры, высокоорганизованные на молекулярном, нано- и макроуровне.

Недавно было обнаружено, что экстракты бактерий и растений обладают уникальными свойствами по синтезу наночастиц на основе металлов. Несмотря на несколько попыток проанализировать различные возможные способы биомиметического синтеза, до сих пор не ясно, какие именно компоненты присутствуют в этих экстрактах, которые приводят к формированию наносборок [8].Предполагается, что цитозольные, а также секреторные компоненты живых клеток могут предлагать матрицу, которая облегчает формирование наносборок в водной среде [9] — [12]. Более ранняя работа по биомиметическому синтезу наночастиц показала, что органические молекулы, присутствующие в цитозоле микробов или растительных клеток, облегчают перенос и сбор материалов, что приводит к образованию самоорганизующихся и совместно собранных наночастиц с однородной консистенцией [9], [ 10]. Экстракты листьев Алоэ вера , Azardirachta indica , Cymbopogon flexuosus были использованы в синтезе наночастиц золота, серебра, кадмия и висмута [9], [11], [12].Взяв за основу более раннюю работу по биомиметическому синтезу наночастиц металлов и неорганических материалов, мы определили влияние экстракта листьев Алоэ вера на органические молекулы. С этой целью мы использовали аналог азотистых оснований 5-фторурацил (5-FU) в качестве модельного соединения. 5-ФУ — одно из самых эффективных противораковых средств, используемых при лечении рака прямой кишки, рака головы и шеи, поджелудочной железы и груди. Это пролекарство, которое требует преобразования в 5-фтордезоксиуридинмонофосфат и 5-фтордезоксиуридинтрифосфат в раковых клетках [13], [14].Препарат также выпускается в форме мазей, широко применяемой для местного применения [15].

В настоящей работе мы описываем простой метод синтеза наночастиц 5-ФУ с использованием экстракта листьев Алоэ вера . Синтезированные наночастицы 5-FU были охарактеризованы различными микроскопическими, а также спектрофотометрическими методами. Затем, чтобы увидеть, сохраняют ли наночастицы 5-FU противораковую активность, было проведено исследование клеточной цитотоксичности с использованием клеточных линий HT-29 и Caco-2 (колоректальная аденокарцинома человека).

Результаты

Бесцветный клейкий гель из листьев алоэ вера широко используется в качестве антибактериального, нейтрацевтического, противовоспалительного и иммуномодулирующего средства [16]. Недавно сообщалось, что он помогает в биоконверсии металлов, а также неорганических материалов в нано-сборки [12]. Мы задавались вопросом, можно ли распространить потенциал экстракта листьев Алоэ вера на формирование наночастиц неорганического материала на образование наночастиц органических молекул.Неожиданно было обнаружено, что инкубация 5-ФУ с экстрактом листьев Алоэ вера приводит к биообразованию наночастиц 5-ФУ.

Биомиметический потенциал экстракта листьев Алоэ вера был впервые установлен путем оценки его способности превращать золотохлористоводородную кислоту (HAuCl ₄ ) в наноразмерные частицы золота [12]. Инкубация экстракта листьев Алоэ вера с водным раствором HAuCl ₄ привела к появлению лилово-красного цвета в растворе примерно через 12 ч инкубации, что указывает на образование наночастиц золота (данные не показаны).Синтез наночастиц золота был дополнительно подтвержден спектром поглощения раствора в видимой области, который показывает характеристическую полосу поверхностного плазмонного резонанса (ППР) наночастиц золота с центром при 560 нм (рис. S1). На следующем этапе исследования мы использовали тот же экстракт листьев для приготовления наночастиц 5-FU.

УФ спектральный анализ

Спектры УФ-поглощения были записаны как для водной суспензии наночастиц 5-FU, так и для ее свободной формы (рис. 1A). Максимальное поглощение свободного лекарства составляет 271 нм.Смешивание 5-ФУ с экстрактом листьев Алоэ вера приводило к мгновенному уменьшению поглощения 5-ФУ. Для простоты наблюдаемый спектр поглощения был обозначен как наблюдение в нулевой момент времени (рис. 1А). Интересно, что более длительная инкубация приводит к возобновлению поглощения со значительным увеличением интенсивности различных характеристических пиков в зависимости от времени. После резкого гашения восстановление исходных пиков со временем указывает на то, что синтезированные наночастицы 5-FU также специфически поглощают на тех же длинах волн.Например, значительно более высокое поглощение при ∼245 нм и ∼192 нм предполагает, что хромофор C = O вместе с гетероатомом (-N), содержащим конъюгированное пиримидиновое кольцо, остается нетронутым как в свободных, так и в нано-собранных молекулах лекарства (рис. 1A). . Значительный синий сдвиг в области 272 нм свидетельствует о том, что хромофоры активно участвуют в нековалентном связывании азотистых оснований и в конечном итоге участвуют в образовании наночастиц.

Рис. 1. Спектрофотометрический анализ наночастиц 5-FU.

( A ) Временной кинетический эффект экстракта листьев алоэ вера, опосредованный синтезом наночастиц 5-FU с использованием УФ-спектрофотометрического анализа. Раствор 5-ФУ инкубировали с экстрактом Aloe vera (5 мл 10 ^-3 M 5-FU и 5 мл экстракта Aloe vera ; конечный объем реакционной смеси 10 мл) в течение заданного периода времени (0– 24 ч). Инкубационную смесь сканировали в УФ-диапазоне для анализа характерных пиков. Спектр, показанный в нулевой момент времени, фактически соответствует наночастицам 5-ФУ, полученным сразу после первоначального смешивания свободного 5-ФУ с экстрактом листьев Алоэ вера .( B ) Зависимая от концентрации кинетика экстракта листьев алоэ вера, опосредованная синтезом наночастиц 5-ФУ, что выявлено с помощью УФ-спектрофотометрического анализа. УФ-спектры наночастиц 5-FU, синтезированных с использованием возрастающих количеств экстракта Aloe vera . ( C ) Спектры излучения наночастиц 5-FU, синтезированных с использованием экстракта Aloe vera . Раствор 5-ФУ (10 ^-3 М) инкубировали с увеличивающимся объемом экстракта Алоэ вера и сканировали с использованием спектрофлуориметра.Длина волны возбуждения 260 нм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g001

Было высказано предположение, что микросреда хромофорных групп химического соединения влияет на продолжительность жизни Sπ в основном за счет настройки относительной энергии состояния Sπ и близко лежащее темное состояние Sn [17]. Стабильность перехода π-π * (в случае 5-FU; это перенос электрона от неподеленной пары атома кислорода или азота к более диффузной π * -орбитали) увеличивается как с полярностью, так и с способностью связывания водорода. 5-ФУ с внешней средой.Кроме того, это означает, что в таком микросреде на динамику Sπ не влияет Sn. Более того, поскольку каркас наночастиц обеспечивает относительно менее полярную среду для запутанных молекул лекарственного средства по сравнению с окружающей средой в свободной форме лекарственного средства, это в конечном итоге приводит к расширению спектра поглощения. Похоже, что при сборке наночастиц внешняя среда отдельной молекулы 5-FU модулирует как π-π *, так и n-π * переходы [17], [18].

Более интригующая кинетика синтеза наночастиц зависит от концентрации.В фиксированный момент времени (12 ч) было обнаружено, что абсорбция снижается при добавлении экстракта листьев Aloe vera (1 мл экстракта Aloe ; конечный объем реакционной смеси 10 мл) к 5 мл 10 ⁻³ Решение M 5-FU (Рисунок 1B). Алоэ вера опосредованное преобразование лекарственного средства в наноразмерную сборку приводит к значительному снижению пиков абсорбции. Однако смешивание препарата с относительно большим соотношением экстракта Aloe vera (3 мл экстракта Aloe и 5 мл раствора 10 ^-3 M 5-FU в конечном объеме 10 мл) приводит к увеличению абсорбции. .Добавление более экстракта алоэ вера к 5-ФУ (5 мл экстракта и 5 мл раствора 10 ^-3 M 5-ФУ в конечном объеме 10 мл) привело к дополнительному увеличению интенсивности пика, приближая кривую к этому. свободной формы препарата. Это ясно указывает на то, что более высокая концентрация активных компонентов экстракта листьев Алоэ вера способствует быстрому образованию наночастиц лекарственного средства без изменения химической структуры азотистых оснований.

Анализ спектров флуоресценции

Азотистое основание 5-FU является высоко флуоресцентным, обладающим характеристическими длинами волн возбуждения и излучения [17] — [19].Добавление экстракта листьев Алоэ вера к 5-ФУ привело к снижению интенсивности флуоресценции (рис. 1С). Наблюдаемое снижение относительной интенсивности флуоресценции 5-ФУ, по-видимому, не связано с взаимодействием флуорофорных частей соединения с компонентами экстракта листьев алоэ вера , которые контактируют друг с другом в процессе образования наночастиц. Мы также исключили самотушение, внутреннее свойство некоторых флуорофоров при высоких концентрациях, которое может быть вероятной причиной снижения интенсивности флуоресценции наночастиц [20], [21].Скорее наблюдаемое тушение может быть связано с активным участием флуорофора во взаимодействии между различными молекулами 5-FU, составляющими наночастицы. Фактически, спектры флуоресценции свободного 5-FU предполагают, что по крайней мере 4 различных вида флуорофоров ответственны за поведение флуоресценции 5-FU. Среди них C = O и –NH- являются основными участниками. Эмиссия флуоресценции также обусловлена ​​колебательными модами, включающими растяжение C ₅ –C ₆ , а также движение карбонильных групп вне плоскости.

Заметная особенность касается относительной энергии первой полосы поглощения (S _O → S ₁ ), которая соответствует переходу π → π *. Тенденции энергии могут быть хорошо коррелированы с формой орбит, участвующих в переходе S _O → S ₁ . Фторогруппа в положении C ₅ вносит антисвязывающий вклад в пограничные орбитали, тем самым делая их менее стабильными. Можно сделать вывод, что когда заместитель в положении C ₅ ( cf .-фтор) вызывает эффект гипер-сопряжения, переход S → S ₁ смещен в сторону более низкой энергии по сравнению с урацилом [17], [18]. Напротив, увеличение электронной плотности на карбонильной группе C ₄ , вероятно, отвечает за стабилизацию Sπ. Во время формирования нанокомплекса C = O, а также –NH- группы могут способствовать укладке молекул 5-FU, что, в свою очередь, приводит к резкому гашению наноструктуры. Поскольку в событии флуоресценции участвует более одного вида флуорофора, тушение более очевидно для флуорофоров, которые непосредственно участвуют в формировании сборки наночастиц.

В водной среде 5-FU демонстрирует водородную связь, которая включает образование оболочки H ₂ O по периферии каждой молекулы. После образования наночастиц молекулы 5-ФУ принимают трехмерную структуру, в которой межмолекулярные водородные связи обеспечивают достаточную стабильность частиц. Наблюдение за тем, что наночастицы 5-FU сохраняют флуоресценцию, характерную для исходного азотистого основания, снова привело нас к мысли, что экстракт Aloe vera помогает в сборке наночастиц 5-FU.Кроме того, в данной сборке наночастиц 5-FU различные молекулы, по-видимому, ориентированы в фиксированном положении с помощью нековалентных связей, поскольку нет значительного изменения характеристики флуоресценции исходной молекулы 5-FU. Было высказано предположение, что Sπ возникает в основном из-за возбуждения HOMO → LUMO с характером π / π *, тогда как Sn имеет преобладающий характер HOMO-1 → LUMO (n / π *) [17], [18]. Между прочим, различные фрагменты, которые участвуют в водородных связях, также ответственны за n / π * и π / π * электронный характер 5-FU.

Наблюдаемое изменение картины флуоресценции также можно коррелировать с формой и размером частиц, как в следующем разделе, посвященном исследованиям на просвечивающей электронной микроскопии; мы четко наблюдали эффект увеличения концентрации экстракта листьев Aloe vera на размер синтезированных частиц. Меньшее количество экстракта листьев Алоэ вера приводит к синтезу наночастиц относительно большого размера, которые демонстрируют меньшую интенсивность флуоресценции из-за тушения.Более высокое соотношение экстракта листьев и раствора лекарственного средства приводит к синтезу наночастиц относительно небольшого размера, что в конечном итоге приводит к меньшему тушению и более высокой интенсивности флуоресценции. Наблюдаемое тушение относительной флуоресценции можно объяснить сборкой молекул 5-ФУ в наноразмерных частицах.

Спектр флуоресценции, показанный на рисунке 1C, ясно демонстрирует, что левые плечи значительно смещены в синий цвет. Эта тенденция может быть связана с формой граничных орбиталей 5-FU, а также может быть объяснена увеличением дипольного момента при электронном возбуждении [17], [18].Наблюдаемый синий сдвиг наночастиц 5-FU указывает на то, что флуорофоры находятся в относительно менее полярной среде. Как объяснено для наблюдаемого гашения относительной флуоресценции, эта ситуация возможна, когда молекулы 5-FU наложены друг на друга, что приводит к образованию компактной сборки из частиц. Кроме того, наблюдаемое изменение интенсивности флуоресценции предполагает роль межмолекулярных водородных связей в модулировании взаимодействия между темным и ярким состояниями и, следовательно, времени жизни возбужденного состояния 5-ФУ.Данные флуоресценции, очевидно связанные со сложностью механизма распада возбужденного состояния, позволяют предположить, что в наблюдаемом тушении флуоресценции действуют несколько эффектов.

ТЕМ-анализ синтезированных наночастиц

На рис. 2 показано типичное изображение, полученное с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ), наночастиц 5-ФУ, синтезированных с использованием экстракта листьев Алоэ вера . ПЭМ-анализ четко показал образование гексагональных наночастиц 5-ФУ. Дальнейшие исследования, включающие инкубацию увеличивающегося количества экстракта листьев Алоэ вера с постоянным количеством лекарственного средства, выявили образование наноструктур с различной формой и топологией поверхности.Было обнаружено, что размер и длина края уменьшаются, когда больший объем экстракта листьев Алоэ вера использовали для синтеза наночастиц. Инкубация с относительно меньшим количеством Aloe vera (1 мл экстракта Aloe vera и 5 мл раствора 10 ^-3 M 5-FU; конечный объем реакционной смеси 10 мл) приводит к образованию частиц с большими слегка шероховатая длина кромки (данные не показаны). Однако при увеличении количества экстракта Aloe vera с 1 до 5 мл наблюдалась иная тенденция.Синтез наночастиц с использованием большего количества Алоэ вера приводит к образованию гексагональных наночастиц с острыми краями (рис. 2А). Столбчатая диаграмма, представляющая распределение частиц по размерам, показана на рисунке 2C. Симметричный анализ длины края изображения HRTEM одной гексагональной наночастицы заметно подчеркивает разницу в размере и форме сформированной наноструктуры (рис. 2B). Можно предположить, что инкубация раствора 5-ФУ с относительно большой долей экстракта листьев Алоэ вера приводит к образованию гексагональной структуры из-за множественных двойниковых частиц (МТП).Ся и его сотрудники [22], [23] наблюдали, что наноструктуры развиваются из MTP в результате анизотропного роста, вызванного определенными агентами, определяющими форму. Мы предполагаем, что MTP играют жизненно важную роль в формировании гексагональной наноструктуры 5-FU. Образование изоморфных частиц гексагональной формы указывает на то, что кристаллографическая плоскость имеет самую высокую атомную плотность. В целом частицы пластинчатой ​​морфологии растут быстрее, чем частицы симметричной формы.

Рис. 2. Изображения наночастиц 5-FU с помощью просвечивающей электронной микроскопии.

( A ) Типичное изображение ПЭМ наночастиц 5-ФУ, синтезированных путем инкубации 5 мл раствора 5-ФУ 10 ^-3 M с 5 мл экстракта Алоэ вера в течение 48 часов. ( B ) ПЭМ-изображение пластины в виде гексагональных наночастиц 5-FU, полученных из 5-FU (10 ^-3 M) с экстрактом листьев Aloe vera (5 мл). Изображение HRTEM показывает различные сечения гексагональных наночастиц 5-FU. ( C ) Изменение диаметра частиц при инкубации 10 ^-3 M раствора 5-FU (5 мл) с 5 мл экстракта Aloe vera в течение 48 часов.( D ) Анализ размера частиц наночастиц 5-FU, определенный с помощью анализатора частиц Nanofox. ( E ) График, показывающий размер наночастиц, полученный исследованиями динамического рассеяния света. (F – G) Рентгеноструктурный анализ наночастиц 5-FU. Картина дифракции рентгеновских лучей показывает характерный интенсивный пик при угле дифракции (2θ) 16 °, 19 °, 22 ° и 28 °. Дифракцию рентгеновских лучей наночастиц 5-FU анализировали при угле дифракции (2θ) ( F ) 20–30 и ( G ) 25–30 соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g002

Размер наночастиц 5-ФУ был дополнительно подтвержден анализатором частиц наноокс. Распределение частиц по размерам наблюдали с помощью цифрового анализа изображения частиц. Появление преобладающего острого одиночного пика около 40 нм дополнительно подтвердило данные о размере ПЭМ (рис. 2D). Размер наночастиц 5-FU также анализировали с помощью исследований динамического рассеяния света. Распределение диаметров частиц показало основной пик при 35 нм вместе с некоторыми незначительными пиками (рис. 2E).Исследования распределения по размерам показывают, что частицы являются более или менее монодисперсными со средним размером 35 ± 5 нм, и дополнительно устанавливают, что размер частиц уменьшается с увеличением концентрации экстракта листьев Aloe vera .

Хотя это было предметом многочисленных недавних исследований [24] — [27], последовательное механистическое объяснение эволюции различных металлических наночастиц, полученных химическими или биомиметическими методами, еще не получено. Был предложен механизм образования наночастиц [8], включающий различные стадии роста частиц за счет как слияния ядер, так и дальнейшего присоединения мономера.Тем не менее природа «направляющего эффекта» до сих пор не ясна. Одна группа исследователей утверждает, что это происходит из-за предпочтительной абсорбции укупорочного агента на поверхность [28], [29], в то время как другие предполагают, что образование дефектов упаковки во время первых актов зародышеобразования является основным фактором асимметричного роста наночастиц. -частицы [30], [31].

Мы обнаружили, что обработка экстракта Алоэ вера протеиназой К, ДНКазой или РНКазой не изменяет его способности способствовать образованию наночастиц 5-ФУ.Это четко исключает любую возможную роль факторов на основе нуклеиновой кислоты или белка, присутствующих в экстракте листьев Aloe vera , в синтезе наночастиц 5-FU. В попытке идентифицировать различные компоненты экстракта листьев Aloe vera , ответственные за образование частиц, мы диализовали экстракт, используя мембрану с отсечкой 3 кДа. Было обнаружено, что компоненты, которые регулируют индукцию образования наночастиц, имеют молекулярную массу менее 3 кДа, поскольку экстракт при прохождении через диализный мешок теряет 90% своей активности.Мы также обнаружили, что даже после полного осаждения 80% сульфатом аммония экстракт все еще был способен индуцировать образование как золота, так и наночастиц 5-FU (данные не показаны). Кроме того, было обнаружено, что кипячение экстракта в течение 15 мин не устраняет его потенциал синтеза наночастиц (данные не показаны). Эти результаты согласуются с исследованием других групп, предполагающим, что водорастворимое низкомолекулярное соединение отвечает за синтез наночастиц [12].

Определение дзета-потенциала наночастиц

Хорошо известно, что размер и поверхностный заряд частиц играют важную роль в его поглощении клетками [32]. Кроме того, поверхностный заряд, который обычно описывается как дзета-потенциал, приобретаемый системой частиц, регулирует период полураспада частицы in vitro , а также in vivo . Принимая во внимание тот факт, что помимо наноразмеров, поверхностный заряд также играет важную роль в регулировании стабильности наночастиц, мы определили дзета-потенциал наночастиц 5-FU.Было обнаружено, что дзета-потенциал наночастиц 5-FU составляет -0,75 ± 0,05 мВ, что позволяет предположить, что частицы могут противостоять среде биологической жидкости при их введении в хозяина [32].

Кристаллическая природа наночастиц 5-ФУ

Несмотря на то, что ПЭМ-анализ предоставил прямые доказательства, подтверждающие образование наносборок 5-FU, кристаллическая структура наносборок была установлена ​​с помощью рентгеноструктурного исследования. Известно, что противораковое средство 5-фторурацил существует в двух кристаллических формах.Форма I [33] кристаллизуется в пространственной группе Pī и демонстрирует сложный мотив листа с водородными связями с четырьмя кристаллографически независимыми молекулами с областями близких контактов F ··· F. Недавно обнаруженная форма II (33) (P2 ₁ / c , Z ‘ = 1) принимает ленточный мотив с водородными связями, при этом каждая молекула образует четыре связи NH ··· O с двумя соседними молекулами. Слои складываются как (−1 0 2) плоскости Миллера, образуя трехмерную кристаллическую структуру [34]. Поиски предсказаний кристаллической структуры для минимумов энергии решетки [34] показали, что форма II является наиболее стабильной упаковкой.Недавнее моделирование молекулярной динамики [35] предполагает, что присутствие воды усиливает рост формы I, поскольку как карбонильные, так и аминные функциональные группы остаются сильно сольватированными и, следовательно, их объединение в димеры затруднено; в то время как нитрометан способствует образованию формы II. Поэтому мы предполагаем, что исключение молекул воды во время формирования наносборки привело к тому, что молекулы 5-ФУ приобрели форму II, что подтверждает наши данные о флуоресценции, согласно которым взаимодействия димеризации / полимеризации и столкновительного гашения между флуоресцентными фрагментами в процессе формирования наносборки приводят к наблюдаемому тушению флуоресценции. [36].Как показано на рис. 2F и 2G, картины дифракции рентгеновских лучей наносборок показали кристаллическую природу наночастиц, синтезированных из 5-ФУ с помощью экстракта Алоэ вера , и пики были намного более заметными, чем пики свободного 5-ФУ вблизи базовой линии при 2θ 15–30 °. Данные дифракции рентгеновских лучей подтвердили, что при образовании наночастиц структурные компоненты (молекулы 5-ФУ) сохраняют свою естественную кристаллическую структуру. Подтверждая электронно-микроскопический анализ, данные XRD предполагают гексагональную структуру наночастиц 5-FU.Спектр дифракции рентгеновских лучей чистого 5-FU показывает характерные интенсивные пики при угле дифракции с 2θ при 16 °, 19 °, 22 ° и 28 °. Пики указывают на кристаллическую природу наночастиц 5-FU. Было обнаружено, что пики дифракции рентгеновских лучей для свободного 5-FU имеют более или менее одинаковую картину дифракции, за исключением диапазона 2θ от 35 ° до 50 °. Исследования XRD предполагают, что нано-сборки имеют одинаковые индексы Миллера для свободной формы препарата. Самый заметный пик (при 2θ 27,79) показал одинаковые плоскости Миллера (2–12) в обоих случаях с d-интервалом 3.16 Å. Кроме того, данные XRD предполагают, что структурная целостность исходных молекул сохраняется за счет наночастиц 5-FU.

Атомно-силовой микроскопический анализ

На рис. 3 показаны репрезентативные изображения с помощью атомно-силовой микроскопии (АСМ) лекарственного препарата с наночастицами, приготовленного с использованием 5 мл экстракта листьев Алоэ вера через 48 часов. При микроскопическом анализе наблюдали ряд гексагональных (или похожих на гексагональных) наночастиц. Нано-частицы можно увидеть перекрывающимися или в виде кластеров, что подтверждает данные ПЭМ.В соответствии с исследованиями TEM и DLS, размер наночастиц был обнаружен в диапазоне 30–50 нм при отслеживании с помощью 2D-изображения. Высота наночастиц 5-FU увеличена для лучшего восприятия тонких структур. АСМ также измеряет данные о высоте, визуализированные с помощью трехмерной АСМ с одной поверхностью.

Рис. 3. Исследование наночастиц 5-FU с помощью атомно-силовой микроскопии.

Типичное изображение АСМ наночастиц 5-FU, синтезированных инкубацией 5 мл 10 ^-3 M 5-FU с 5 мл экстракта Aloe vera в течение 48 часов.( A ) 2D, ( B ) 3D-изображения наночастиц 5-FU ( C ) Гистограмма АСМ-анализа наночастиц 5-FU.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g003

Инфракрасный анализ с преобразованием Фурье

Наночастицы 5-FU также были охарактеризованы с помощью инфракрасного анализа с преобразованием Фурье (FT-IR) с предположением, что собранные структуры могут происходить в результате захоронения / воздействия различных функциональных групп исходного соединения, что может привести к изменению соответствующего процентного содержания. интенсивность передачи [37].На рис. 4 показаны инфракрасные спектры наночастиц 5-ФУ в области 900–1800 см ^–1 , полученные в различных экспериментальных условиях. Спектры FT-IR экстракта листьев (спектр I) показывают много интенсивных пиков. Поглощение при 1542 см ^-1 является характеристикой полинезамещенного моноядерного кольца, а плечо около 1730 см ^-1 обусловлено растяжением C = O карбонильных соединений. Это согласуется с некоторыми предыдущими исследованиями FTIR того же экстракта [9]. Спектр лекарственного средства (спектр II) показывает заметный пик при 1255 см ^-1 , который обусловлен растяжением связи C = O арилкетона, а поглощение при 1692 см ^-1 является характерной чертой вторичного амина. в растворе, так как в 5-FU есть две группы –NH.В спектре свободного лекарственного средства видна полоса в области 1580–1650 см ^–1 , соответствующая колебаниям растяжения кольца C = N и C = C. Полоса поглощения около 1724 см ^-1 может быть связана с частотой растяжения группы C = O. Полосы при 1450 см ^-1 и 1350 см ^-1 характерны для колебания замещенных пиримидиновых соединений [38]. Полосы поглощения при 1180 см ^–1 и 1251 см ^–1 отнесены к колебаниям C – O и C – N соответственно.

Рис. 4. FTIR-спектры наночастиц 5-FU.

спектр 1; Экстракт алоэ вера , спектр II; Только 5-ФУ, спектр III; Наночастицы 5-ФУ, синтезированные с 3 мл экстракта Алоэ вера , спектр IV; Наночастицы 5-ФУ синтезированы с 5 мл экстракта Алоэ вера . Все спектры FTIR были записаны после 48 часов инкубации 5-FU с экстрактом листьев Aloe vera .

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g004

В спектре наночастиц 5-ФУ (спектр III и IV) сохраняется большинство выступающих пиков исходного соединения. Это говорит о том, что никаких серьезных изменений в химической структуре 5-FU при образовании наночастиц не произошло. Например, заметные пики на 1255 см ^-1 , 1692 см ^-1 , 1542 см ^-1 , 1579 и 1730 см ^-1 являются общими для наноструктурированной и свободной формы 5-FU. Кроме того, появляются новые интенсивные пики при 1019 и 1468 см ^-1 , которые возникают из-за обнажения или захоронения функциональной группы в наноструктуре.Появление нового пика при 1019 см ⁻¹ могло быть связано с плоскостным изгибом соединения C – H в собранной наноструктуре. Также можно предположить, что пик при 1019 см ^-1 обусловлен образованием группы S = O, а S произошла из экстракта Aloe vera , поскольку в молекуле 5-FU нет S. В другом объяснении, поглощение при 1019 см ^-1 можно рассматривать как пробу для арилового эфира (Ar-OC), который, вероятно, образуется из-за образования комплекса между ароматическими соединениями, присутствующими в экстракте Aloe vera , и C = O часть лекарственного средства.Этот пик может быть также связан с изгибом ароматического кольца C – H в плоскости. Неясно, связано ли поглощение при 1468 см ⁻¹ с C – H-изгибом δ _s CH ₂ пиримидинового кольца, происходящего от наночастиц 5-FU, или с растяжением CC-кольца нового комплекса в результате реакции между экстрактом листьев алоэ вера и 5-ФУ. Наш FTIR-анализ свободной формы лекарственного средства и наноструктур 5-FU в диапазоне 2400–2300 см ^–1 выявил сходную картину в обоих случаях (данные не показаны).Мы предполагаем, что получение формы частицы может быть результатом либо ферментативной реакции, либо шаблона конкретной макромолекулы, которая регулирует кинетику роста синтеза наночастиц.

Кинетика высвобождения лекарственного средства из наночастиц 5-ФУ

Чтобы показать, что нано-сборки могут действовать как резервуар 5-ФУ и способствовать замедленному высвобождению лекарства в течение длительного периода времени, был исследован профиль высвобождения наночастиц. Для этого несколько образцов наночастиц 5-FU разливали в различные микровиалы.Профиль высвобождения показал медленное и устойчивое высвобождение лекарства в течение длительного периода времени. Исследование кинетики высвобождения указывает на стабильность наночастиц при различных pH и температурных условиях. Было обнаружено, что наночастицы выдерживают компоненты плазмы в течение периода более 120 часов, что приводит к высвобождению менее 40% всего лекарства (рис. 5).

Рис. 5. Профиль высвобождения наночастиц 5-FU в различных условиях.

Чтобы исследовать кинетику высвобождения наночастиц 5-FU, несколько образцов состава были распределены в различные микровиалы.В каждый флакон помещали 1,0 мл среды для высвобождения (20 мМ стерильный PBS, сывороточный или гистидиновый буфер). По истечении установленного периода времени суспензию центрифугировали и аликвоту анализировали на содержание 5-FU спектрофотометрически, как описано в разделе «Методология».

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g005

Цитотоксический потенциал наночастиц 5-ФУ

Цитотоксический потенциал образованных наночастиц 5-ФУ в отношении двух клеточных линий, а именно.HT-29 и Caco-2 оценивали путем определения количества жизнеспособных клеток, выживших после их инкубации с лекарством в течение установленного периода времени с использованием МТТ (3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -5- (3-карбоксиметоксифенил) -2- (4-сульфофенил) -2H-тетразолий) метод [39]. Анализ цитотоксичности предполагает, что наночастицы 5-FU проявляют различную степень цитотоксичности в отношении различных линий раковых клеток. Цитотоксический эффект 5-ФУ был выражен в отношении обеих клеточных линий, IC ₅₀ свободного 5-ФУ оказался равным 0.30 и 0,34 мкМ для клеток HT-29 и Caco-2 соответственно. Было обнаружено, что способность наночастиц 5-FU ингибировать рост обеих линий раковых клеток зависит от времени. IC ₅₀ наночастиц 5-FU составлял 0,21 мкМ против клеток Caco-2, в то время как IC ₅₀ наночастиц 5-FU против клеток HT-29 составлял 0,25 мкМ (рис. 6).

Рис. 6. Цитотоксический эффект наночастиц 5-ФУ.

Против клеточных линий ( A ) HT-29 и ( B ) Caco-2. МТТ-анализ использовали для определения дифференциальной цитотоксичности наночастиц 5-ФУ против обеих клеточных линий.Клетки распределяли с плотностью 5 × 10 ⁴ клеток на лунку в 96-луночных планшетах с U-образным дном в трех экземплярах и обрабатывали возрастающей концентрацией различных нано-составов 5-ФУ. После 48 часов инкубации добавляли 20 мкл реагента МТТ и планшет дополнительно инкубировали в течение 48 часов. После этого добавляли 100 мкл буфера для лизиса. Планшеты дополнительно инкубировали в течение 2 часов, и оптическую плотность считывали при 570 нм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g006

Анализ апоптоза и клеточного цикла

Противораковый потенциал наночастиц оценивали на основе экспрессии различных факторов апоптоза в обработанных клетках.Проапоптотический ген p53 является ключевым регулятором пролиферации и гибели клеток [40]. Неспособность индуцировать нормальную экспрессию функционального p53wt приводит к нерегулируемому росту опухолевых клеток. Белки семейств Bax и bcl-2 также играют важную роль в регуляции апоптоза [41] — [43]. Было продемонстрировано, что продукт bcl-2 подавляет апоптоз [44], в то время как сверхэкспрессия гена bax может ингибировать функцию bcl-2 и способствовать апоптозу [45]. Bax является мишенью для р53 и, как известно, трансактивируется в ряде систем во время апоптоза, опосредованного р53 [46].

События нормального клеточного цикла жестко регулируются циклином, циклин-зависимыми киназами (CDK), ингибиторами CDK (CDKI) и другими генами-супрессорами опухолей. Нарушение регуляции клеточного цикла приводит к аномальной пролиферации клеток с поврежденной ДНК и устранению апоптоза [47]. Клеточные циклы останавливаются при переходе от G1 к S-фазе (контрольная точка G1) или от G2 к M-фазе (контрольная точка G2) после повреждения ДНК [48]. В контрольной точке G1 семейство CIP / KIP, включая p21 ^{WAF1 / CIP1} и p27 ^KIP1 , действуют как ингибиторы.Известно, что блокада клеточного цикла в фазе G2 / M связана с инактивацией митотических Cdks. Наблюдаемая регуляция p21 при обработке наночастицами 5-FU может быть коррелирована с ингибированием кинетики клеточного цикла [49]. Ингибитор Cdk p21 связывается с комплексами циклин B1-Cdc2, которые блокируют активацию Cdc2 с помощью киназы активации Cdk, тем самым предотвращая митотическое вступление (M-фаза) [50], [51]. Обычно считается, что 5-FU вызывает остановку G1-S-фазы клеток, тем самым останавливая их прогрессирование от G1 к S-фазе и впоследствии прокладывая путь апоптозу раковых клеток через p53-зависимый путь [52].Другие исследования подтвердили его роль в ингибировании клеточной прогрессии в фазе G2 / M [53].

Мы расширили наше исследование, чтобы получить представление о модуляции, опосредованной 5-ФУ наночастицами, различных факторов, регулирующих апоптоз. Был проведен вестерн-блоттинг для определения уровня различных факторов клеточного цикла и апоптоза. Инкубация состава нанопрепарата 5-ФУ с раковыми клетками привела к усилению экспрессии p53wt по сравнению со свободной формой лекарственного средства (фиг. 7). Мутации в гене p53 обычно обнаруживаются при большинстве злокачественных новообразований [54].Белок p53, как известно, опосредует остановку клеточного цикла [55], а также действует как фактор транскрипции, который связывается с консенсусной последовательностью ДНК p53 в чувствительных генах, таких как p21 [56]. Данные настоящего исследования предполагают, что состав нанопрепарата 5-ФУ подавляет экспрессию p53mut (уменьшение в два раза), тем самым усиливая индукцию апоптоза в раковых клетках. В контрольных группах (клетки, обработанные только экстрактом листьев Aloe vera ) профиль экспрессии регуляторных белков существенно не изменился, что позволяет предположить, что нано-собранный 5-FU более эффективен в подавлении экспрессии гена p53mut по сравнению со свободной формой белка. препарат, средство, медикамент.Мы также проанализировали профиль экспрессии p21 и циклина B1 в обработанных клетках и обнаружили, что состав нанопрепаратов увеличивает уровень белка p21, сравнимый со свободным 5-FU. Было обнаружено, что в присутствии нанокомпозиции 5-ФУ экспрессия циклина B1 снижается примерно в 2,5 раза. Интересно, что наночастицы 5-FU индуцируют экспрессию bcl-2 и bax так же эффективно, как и свободная форма препарата. Повышение уровня bax в клетках, обработанных наночастицами 5-ФУ (рис. 7), может быть коррелировано с участием митохондриального (внутреннего) пути в апоптозе.Это приводит к высвобождению цитохрома с, что в конечном итоге приводит к активации каспазы [45].

Рис. 7. Влияние наночастиц 5-FU на экспрессию про / антиапоптотических факторов в клеточной линии Caco-2.

Клеточный лизат получали, как описано в Методологии, и анализировали на экспрессию белка с использованием специфических антител. Для количественной оценки равной нагрузки мембраны также зондировали антителом к ​​β-актину. Интенсивность полос определяли количественно с использованием программного обеспечения для анализа изображений в системе документирования изображений геля.Дорожка 1, только RPMI; Дорожка 2, Только экстракт листьев алоэ вера ; Только дорожка 3, 5-ФУ; Дорожка 4, наночастицы 5-ФУ, полученные смешиванием раствора 5-ФУ (10 ^-3 М) с 3 мл экстракта Алоэ вера и дорожка 5, наночастицы 5-ФУ, полученные смешиванием 5- Раствор FU (10 ⁻³ M) с 5 мл экстракта Aloe vera .

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032049.g007

Принимая во внимание тот факт, что каспазы являются важнейшими медиаторами апоптоза, мы оценили экспрессию каспазы-9 при лечении наночастицами 5-ФУ с помощью конфокальной микроскопии.Каспаза-9 является апикальной каспазой внутреннего пути [57]; инициируется цитохромом с, высвобождаемым из межмембранного пространства митохондрий в цитозоль [57], что в конечном итоге индуцирует образование апоптосом. Было обнаружено, что экспрессия каспазы-9 увеличивалась в зависимости от времени для наночастиц 5-ФУ по сравнению со свободной формой лекарственного средства (фиг. 8). В случае необработанных клеток не наблюдалось увеличения экспрессии каспазы-9 ни в какой момент времени. Каспаза-9 активирует эффекторные каспазы-3 и -7, которые расщепляют несколько других клеточных белков, что приводит к характерным биохимическим и морфологическим особенностям, связанным с апоптозом.Кажется, что наноформа 5-ФУ имеет большой потенциал в индукции каспазы-9 и, таким образом, способствует более эффективному апоптозу клеток по сравнению с ее свободной формой.

Фигура 8. Вовлечение каспазы-9 в апоптоз клеток Caco-2, опосредованный 5-FU, как выявлено с помощью конфокальной микроскопии.

клеток Caco-2, обрабатывали только ( a ) RPMI, ( b ) свободным лекарственным средством 5-FU и ( c ) наночастицами 5-FU в течение 24 часов. После инкубации в течение установленного периода времени с различными препаратами 5-FU клетки промывали и фиксировали 4% параформальдегидом и 0.19% пикриновая кислота в PBS (pH 7,4) в течение 1 ч при комнатной температуре (RT). Фиксированные клетки пермеабилизировали 0,1% SDS в PBS при комнатной температуре в течение 10 мин, блокировали 2% FCS, окрашивали поликлональным антителом, которое обнаруживает только расщепленную каспазу-9 35 кДа (BD, Индия). Взаимодействие выявляли с использованием конъюгированного козьего антикроличьего зонда IgG-FITC (Sigma, Индия). Затем клетки визуализировали под флуоресцентным микроскопом (возбуждение при 488 нм, эмиссия при 505–530 нм) масштабной линейкой 10 мкм.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0032049.g008

Повышающая регуляция p53 вместе с понижающей регуляцией экспрессии bcl-2 после обработки 5-FU может частично объяснять механизм, участвующий в индуцированном 5-FU апоптозе в клетках. . Следует отметить, что ранее сообщалось, что как p53-, так и / или p21-зависимые и независимые пути участвуют в индуцированной 5-FU остановке клеточного цикла и апоптозе раковых клеток; клеточные ответы были разными, и механизмы могут быть отнесены к конкретным вовлеченным типам клеток и дозам используемых противораковых агентов [53], [58].Наши исследования показывают, что при низкой концентрации наночастицы 5-FU задерживают клетки в фазе G2 / M. Это согласуется с более ранними исследованиями, в которых сообщалось о влиянии свободного 5-FU на фазу G2 / M при низкой концентрации, тогда как относительно высокая концентрация препарата поддерживала клетки в фазе G1 [53]. Кроме того, было обнаружено, что наночастицы активируют проапоптотический фактор аналогично свободной форме лекарственного средства. Тем не менее, было обнаружено, что наночастицы проявляют свой эффект более эффективно, поскольку равное количество наночастиц вызывает примерно трехкратное увеличение p53 дикого типа и более чем двукратное снижение экспрессии мутанта p53 по сравнению с его свободной формой.

Обсуждение

Биомиметический синтез наночастиц с использованием биологических объектов считается чистым, нетоксичным и экологически безопасным методом. В более ранних отчетах задокументировано использование таких растений, как овес ( Avena sativa ), лемонграсс ( Cymbopogon flexuosus ), бульон из листьев нима ( Azardirachta indica ), амла ( Emblica officinalis ), корица ( Camphora). и экстракт листьев алоэ вера в синтезе наночастиц на основе металлов (золота, серебра, железа и кадмия).Удивительно, но методы распространения этих подходов на органические молекулы, такие как наночастицы на основе лекарств от рака, еще не исследованы. Они очень желательны из-за превосходства лекарственных форм с наночастицами над свободными формами лекарств. Трансформация молекул исходного лекарственного средства до нанометрового размера может привести к их высокому захвату через биологические мембраны. Более того, наноразмерные лекарственные формы, не содержащие каких-либо фармацевтических наполнителей, являются предпосылкой для приготовления более эффективных препаратов (рис. 9).Такие составы позволяют избежать проблем, связанных с биоразлагаемостью или биосовместимостью и т.д. различных носителей (наполнителей), используемых в обычных лекарственных формах.

В настоящем исследовании мы исследовали потенциал экстракта листьев Алоэ вера в синтезе наночастиц 5-ФУ. Во-первых, мы определили влияние увеличения количества экстракта Алоэ вера на синтез наночастиц 5-ФУ. Представляется, что особенности спектров наночастиц регулируются формой и размером частиц.Дискретные оптические переходы наблюдались в монодисперсной системе наночастиц 5-ФУ. И УФ-спектры, и спектры флуоресценции показывают постоянный сдвиг в синий цвет с увеличением размера частиц. Фактически из-за их большого размера свет не может поляризовать наночастицы однородно, и эффект замедления приводит к возбуждению мод более высокого порядка [59]. Синтез наночастиц 5-FU был дополнительно подтвержден методами ПЭМ, ИК-Фурье и АСМ. Все эти результаты хорошо коррелируют друг с другом и подтверждают состав наночастиц FU.

Считается, что наноразмер системы доставки имеет большое значение для их поглощения популяцией клеток-мишеней. Чтобы подтвердить нашу гипотезу, мы провели серию из экспериментов in vitro с использованием клеточной линии caco-2 и HT-29 и установили, что наночастицы 5-ФУ проявляют лучшую противоопухолевую активность по сравнению со свободной формой препарата. Наконец, более высокая эффективность наночастиц 5-ФУ была установлена ​​благодаря их способности заметно снижать экспрессию антиапоптотического гена по сравнению со свободной формой препарата.

Заключение

Текущие области исследований в области химиотерапии рака включают разработку терапевтических систем доставки, позволяющих использовать альтернативные пути введения лекарств. Наноматериалы находятся на переднем крае быстро развивающейся области нанотехнологий. До сих пор для разработки наночастиц использовались различные технологии. Наноразмер материала делает их уникальными и незаменимыми во многих сферах деятельности человека. Биологический синтез наночастиц по-прежнему сосредоточен на синтезе металла, однако настоящее исследование, основанное на потенциале биомиметического синтеза органических молекул, открывает новые перспективы в терапии рака.Экстракт листьев Алоэ вера индуцировал развитие наноорганизмов 5-ФУ, которые, вероятно, будут более эффективными по сравнению со свободной формой препарата и требуют дальнейшего изучения для их будущего использования в лечении рака на моделях животных. Точная картина относительно эффективности состава наночастиц 5-FU может быть получена, если мы введем крошечные нанотела в модели животных для лечения рака. В настоящее время мы изучаем такие разработки в надежде, что вскоре появится возможность ввести новые составы наночастиц, которые будут не только более эффективными, но и лишены предполагаемых ограничений токсичности, связанных с наночастицами.

Материалы и методы

Материалы

5-Флуроурацил, диализная мембрана (молекулярная масса, отсеченная 3 кДа) и набор для оценки белка бицинхониновой кислоты (BCA) были получены от Sigma Aldrich, США. Стерильные фильтры размером 0,22 мкм были приобретены у Millipore. Нитроцеллюлозная мембрана, кроличьи антитела против р53 дикого типа, кроличьи антитела против мутантного р53, кроличьи антитела против циклина-B1 и кроличьи антитела против β-актина были закуплены у компаний BD Pharmingen и Santa Cruz. Линии клеток Caco-2 (ATCC, номер HTB-37) и HT-29 (ATCC, номер HTB-38) были получены из ATCC.

Препарат

Экстракт листьев алоэ вера

Тщательно промытые Листья алоэ вера (30 г) были мелко нарезаны и кипячены в 100 мл стерильной дистиллированной воды, как описано ранее [12]. Кипяченный экстракт фильтровали через фильтр Whatman, и фильтрат хранили при -20 ° C до дальнейшего использования.

Синтез нанопрепарата с использованием экстракта листьев

Алоэ вера

Увеличивающиеся объемы (1–5 мл 30% -ного раствора) экстракта листьев Aloe vera добавляли к 5 мл 10 ^-3 M раствора 5-FU in и доводили объем до 10 мл. деионизированной водой.Смесь инкубировали в течение заданного периода времени при комнатной температуре (25 ° C), а затем центрифугировали при 20000 g для осаждения наночастиц 5-FU. Наночастицы суспендировали в 1 мл деионизированной воды и далее характеризовали различными спектрофотометрическими методами.

УФ и флуоресцентный спектроскопический анализ

УФ-спектроскопический анализ

нанопрепарата, синтезированного из экстракта листьев Aloe vera , проводили на двухлучевом спектрофотометре (Jasco, модель V-750), работающем с разрешением 1 нм [60].Спектры флуоресценции регистрировали с помощью спектрофлурометра SPEX fluorolog-2, корректировали на спектральный отклик системы детектирования и сглаживали усреднением по соседним объектам.

Просвечивающая электронная микроскопия

Наночастицы

5-FU охарактеризованы с помощью ПЭМ-исследований. Образцы для ПЭМ-анализа были приготовлены в соответствии с протоколом, опубликованным в другом месте, путем помещения капли синтезированных наночастиц на покрытую золотом отрицательную сетку с последующим испарением растворителя [61]. ПЭМ-анализ проводился на модели Perkin-Elmer, которая работала при ускоряющем напряжении 1000 кВ.

Определение дзета-потенциала

Дзета-потенциал наночастиц 5-FU определяли с использованием программного обеспечения DTS (Malvern Instrument Limited, Великобритания) на основе технологии M3-PALS. Как свободную, так и форму наночастиц 5-FU лиофилизировали в 2 мл микроцентрифужной пробирке, и образцы восстанавливали в фосфатном буфере, pH 7,4. Дисперсию помещали в ячейку для электрофореза для измерения электрофоретической подвижности, и данные использовали для получения значений дзета-потенциала.Эксперименты повторяли трижды и рассчитывали средний дзета-потенциал.

Рентгеноструктурный анализ наночастиц 5-FU

Регистрировали рентгеновскую дифрактограмму наночастиц 5-FU как функцию угла 2-θ. Все дифракционные картины были получены в виде пошаговых сканирований. Наночастицы 5-FU были помещены в лиофилизированную форму для запуска их пошагового сканирования, были установлены напряжение и ток трубки и введены следующие параметры: начальный угол 2- θ, размер шага (обычно 0.005 градусов), время счета на шаг (обычно 0,05–1 секунды) и конечный угол 2-θ. После запуска гониометр перемещается по своему диапазону, останавливаясь на каждом шаге на отведенное время. Подсчет рентгеновских лучей на каждом этапе сохранялся в файл на компьютере. По завершении данные были сглажены с помощью взвешенного скользящего среднего для получения дифрактограммы, отображаемой в результатах и ​​обсуждениях. По вертикальной оси записывается интенсивность рентгеновского излучения, а по горизонтальной оси — углы в градусах 2-тета.

Создание изображений с помощью атомно-силового микроскопа (АСМ)

Цифровой приборный многомодовый сканирующий зондовый микроскоп Perkin-Elmer, оснащенный контроллером наноскопа, использовался для измерений АСМ.Наночастицы, образованные совместной инкубацией 5-FU и экстракта листьев Aloe vera , центрифугировали при 20000 g в течение 10 мин при 4 ° C и полученный осадок промывали деионизированной водой для удаления любой оставшейся биомассы. Его повторно суспендировали в минимальном объеме деионизированной воды путем кратковременной обработки ультразвуком и использовали для нанесения капельного покрытия на диск из Si (III). Образцы анализировали с использованием контактного режима АСМ.

Измерение инфракрасной спектроскопией с преобразованием Фурье (FTIR)

FTIR-измерения наночастиц 5-FU были выполнены на спектрофотометре Perkin-Elmer FTIR Spectrum one в режиме диффузного отражения с разрешением 4 см ^-1 [37].Каждый образец сканировали трижды для проверки подлинности данных. Спектры были сняты между 4000 см ^-1 и 900 см ^-1 путем усреднения 128 сканирований для каждого спектра.

Стабильность наночастиц 5-ФУ в сыворотке, фосфатно-солевом буфере и гистидиновом буфере

Чтобы исследовать кинетику высвобождения наночастиц 5-FU, несколько образцов состава были распределены в различные микровиалы. В каждый флакон добавляли 1,0 мл среды для высвобождения (20 мМ стерильный PBS или сывороточный или гистидиновый буфер).Флаконы инкубировали при 37 ° C. Чтобы избежать роста микробов в сыворотке, добавляли 0,01% азида натрия. Аликвоту (40 мкл) супернатанта удаляли после центрифугирования при 10000 g в течение 10 минут при комнатной температуре. В аликвоты добавляли свежий буфер для поддержания постоянного объема суспензии. ВЭЖХ 5-ФУ выполнялась в соответствии с опубликованным протоколом [62], модифицированным в нашей лаборатории. Вкратце, хроматографическое разделение проводили с использованием симметрии C ₁₈ , [размеры шариков колонки 5 мкм (3.9 × 150 мм)]. Подвижная фаза состояла из 40 мМ фосфатного буфера, pH 7,0, с 10% (мас. / Об.) Гидроксидом калия. Скорость потока поддерживалась 1,0 мл / мин, а длина волны детектирования составляла 260 нм. В каждый момент времени вводили 20 мкл образца и регистрировали AUC. Концентрацию образца рассчитывали по стандартной кривой лекарственного средства, построенной в тех же условиях.

Приготовление клеточных лизатов

Противораковый потенциал наночастиц 5-ФУ оценивали на двух линиях раковых клеток человека; а именноCaco-2 и HT-29 (колоректальная аденокарцинома человека). Клетки культивировали в виде монослоя в RPMI 1640 при 37 ° C в инкубаторе с CO ₂ (5% CO ₂ ). Клетки использовали в фазе экспоненциального роста для исследования. После образования монослоя клетки обрабатывали составом 5-ФУ или свободным, или составом наночастиц. Клеточные экстракты были приготовлены в соответствии с опубликованной процедурой, стандартизированной в нашей лаборатории [63]. Содержание белка в образце лизата определяли с использованием набора для анализа белка BCA, бычьего сывороточного альбумина использовали в качестве стандарта.

Анализ МТТ

Клеточные линии (клетки Caco-2 и клетки HT-29) поддерживали в культуральной среде RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки. Клетки высевали с плотностью 5 × 10 ⁴ клеток на лунку в 96-луночный планшет и культивировали в течение 72 часов при 37 ° C. Затем клетки подвергали воздействию различных составов 5-ФУ с использованием концентраций от 0,01 до 900 мкМ. Планшеты инкубировали в течение 48 часов и пролиферацию клеток измеряли, добавляя 20 мкл красителя МТТ (5 мг / мл в PBS) на лунку.Планшеты дополнительно инкубировали еще 4 ч при 37 ° C в увлажненной камере, содержащей 5% CO ₂ . Кристаллы формазана, образовавшиеся в результате восстановления красителя жизнеспособными клетками в каждой лунке, растворяли в 150 мкл диметилсульфоксида и считывали оптическую плотность при 570 нм с помощью планшет-ридера SpectraMax M2 (Molecular devices, США). Результаты выражали как относительную абсорбцию по сравнению с необработанными контролями. Концентрацию 5-FU, дающую 50% ингибирование роста (IC ₅₀ ), рассчитывали с использованием алгоритма среднего эффекта и выражали как среднее значение трех независимых экспериментов.

Вестерн-блот анализ

Вестерн-блоттинг-анализ был проведен для выявления различных про- и антиапоптотических факторов, таких как р53 дикого типа, мутант р53 и циклин-B1, экспрессируемых в клеточных линиях, обработанных 5-ФУ [13], [64], [и 65]. Клетки (Caco-2 и HT-29) лизировали через 48 часов обработки различными составами 5-FU, как описано ранее. Оценка белка производилась с использованием набора BCA (Sigma, Индия) с использованием BSA в качестве стандарта [66]. Равное количество образца белка (30 мкг) разделяли на 10% SDS-полиакриламидном геле и переносили на нитроцеллюлозную мембрану.Мембрану блокировали 5% обезжиренным сухим молоком (Bio-rad, США) с последующей инкубацией с кроличьими антителами против р53 дикого типа, кроличьими мутантными антителами против р53 и кроличьими антителами против циклина-B1. Для количественного определения равной нагрузки мембраны зондировали антителом к ​​β-актину (BD Pharmingen). Конъюгированные с пероксидазой хрена антикроличьи и антимышиные антитела использовали в качестве вторичных антител. Полосы детектировали с использованием системы обнаружения ECL (Enhanced chemiluminisence). Интенсивность полос определяли количественно с использованием программного обеспечения Alpha Image Analysis в системе документации Alpha Image Gel Documentation System.

Анализ апоптоза

Суспензию отдельных клеток получали путем осаждения клеток при 2000 г в течение 10 минут при 4 ° C. Осадок клеток ресуспендировали в 50 мкл холодного PBS и фиксировали в 2 мл 70% ледяного этанола. Клетки промывали стерильным PBS с последующей обработкой 0,1% Triton X-100 в течение 5 мин. После инкубации клетки центрифугировали, ресуспендировали в 1 мл PBS, смешивали с рибонуклеазой (100 мкг / мл) и дополнительно инкубировали при 37 ° C в течение 30 мин. После осаждения клетки ресуспендировали в 1 мл PBS и 50 мкг / мл йодида пропидия (PI) и инкубировали в течение 18 часов при 4 ° C.Наконец, клетки собирали и анализировали на проточном цитометре с использованием программного обеспечения «Cell Quest 2.0» [67].

Определение уровня каспазы-9 конфокальной микроскопией

После обработки наночастицами 5-FU в течение установленного периода времени клетки промывали и фиксировали 4% параформальдегидом вместе с 0,19% пикриновой кислотой в PBS (pH 7,4) в течение 1 часа при комнатной температуре (RT). Фиксированные клетки пермеабилизировали 0,1% SDS в PBS при комнатной температуре в течение 10 минут, блокировали 2% FCS, окрашивали поликлональным антителом, которое обнаруживает только расщепленную каспазу-9 с массой 35 кДа (BD, Pharmingen), и выявляли конъюгированными с FITC козьими антителами. конъюгированный кроличий IgG-FITC (Sigma) [68].Конфокальную микроскопию выполняли с использованием Zeiss, 510 Mete, оборудованного аргоновым ионным лазером, установленным на инвертированном микроскопе.

Статистический анализ

Статистический анализ выполнен с использованием теста Стьюдента t . Различия считались статистически значимыми при значении P <0,05.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Есть много причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или уточнить у системного администратора.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файлах cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

No related posts.